前言
地西泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一种中枢精神系统镇定剂，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的治疗。近年来，地西泮在临床的应用越来越广泛，此类药物在中毒药物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常见，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对血清中的地西泮进行固相萃取、富集，用高效液相色谱仪进行检测。
本文参考《SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西泮及其代谢产物》采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定地西泮的回收效果，实验证明，地西泮回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为2.7 %，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于血液中的地西泮样品前处理。
1、实验过程
1.1仪器与试剂
SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；
LC600高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；
地西泮，1000mg/L，坛墨质检；
甲醇（色谱纯）；
乙酸铵（分析纯）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；
C18固相萃取柱（60mg/3mL莱伯泰科）；
实验用水：超纯水。
1.2 标准工作液的配置
取1mL地西泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。
取20 μL标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL标准工作液。
1.3实验方法
1.3.1 样品制备
取1mL血液，加入100 μL的标准工作液，混匀，使血样中地西泮的加标浓度为200 μg/L，用水稀释到5 mL，涡旋5min，5000 rad/min离心10 min。取全部上清液，待固相萃取处理。
同时做样品空白。
1.3.2 固相萃取及浓缩
按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待测。
图1 地西泮的SPE 1000 方法
1.3.3 HPLC测定水中地西泮
色谱柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；
波 长：230nm；
流 速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
流动相：甲醇：水=65:35V/V
2、实验结果
2.1 地西泮色谱图
2.1.1地西泮标品色谱图
图2为取100μL的标准工作液，用甲醇定容到1.0mL检测（200μg/L），地西泮标品出峰色谱图，出峰时间为12.1min。
图2 地西泮标品出峰色谱图
2.1.2血液中地西泮加标样品色谱图
图3地西泮加标样品出峰色谱图，出峰时间为12.1min。
图3 地西泮加标样品出峰色谱图
2.1.3血液中地西泮样品色谱图
图4地西泮空白样品出峰色谱图。
图4 空白样品色谱图
2.2 HPLC测定血液中地西泮回收率
HPLC测定血液中地西泮回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为 2.7%。
表1 血液中地西泮的加标回收率（加标量200μg/L）
3、实验结论
1、254nm和230nm的波长均可检测到地西泮，但地西泮在230nm波长下，信号响应最高。
2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率和重现性良好，工作效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。
4、参考标准
SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西泮及其代谢产物
高效液相色谱法测定 地西泮中毒患者血浆与血清中地西泮浓度
固相萃取—反相高效液相色谱法同时测定人血清中地西泮及氯硝西泮
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