Cell storage
细胞存储
你需要知道的几点
Q
1. 细胞存储状态
A
目前气相存储已经成为细胞存储的主流方式。气相存储相比液相存储，减少了样品交叉感染的风险，不会产生冻存管破裂的情况。
在生物样本库中，样品通常以2：1的比例存储于超低温冰箱和气相罐中。所有用于复苏细胞的样品（包括来源于血液、组织的）全部存于液氮中【1】。
FDA在2017年的文件中，KYMRIAH细胞疗法注明细胞必须使用气相存储。2020年，再次于abecma的说明书中强调【2】【3】。
▲ UK Biobank 样品存储
Q
2. 细胞存储温度
A
2020年的冷泉港实验手册中，更新了杂交瘤细胞存储的操作步骤，提到长期的细胞存储和高效率的细胞复苏需要存储于-185℃。在此温度下，杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞能够常年保有活性【4】。
Q
3. 细胞存储的重要性
A
细胞的培养，作为新药研发、抗体生产、疫苗生产等的上游工作，可以说是打好基础的重要步骤。
辛苦构建的细胞系，一旦由于存储时的温度过高、温度不均一导致细胞无法复苏或者活性低下，损失的将是整条研发和生产的线路。
Q
4. 低温液氮存储容器的区别
A
常见的液氮存储容器有四种：
1) 液相存储的铝合金液氮罐- Darwin系列
2) 气相存储的液氮箱- Voyager系列
3) 传统气相存储的气相罐- Origin系列
4) 干式存储的气相罐- Polaris系列
▲ Darwin系列
液相存储的铝合金液氮罐- Darwin系列
铝合金液氮罐采用液相存储，存储时间长、存储温度低(-196℃)，但是有交叉污染、冻存管破裂的风险。
存储样本量：
2000~6000个2ml 冻存管
▲ Voyager系列
气相存储的液氮箱-Voyager系列
液氮箱设计之初是用于大型的液相存储，因此罐口设计的较大，便于存储。
当气相存储成为主流后，液氮箱通过底部加装气相平台和铝制导冷套筒实现气相存储功能。
然而液氮箱顶部温度只能达到-135℃，上下冻存盒的温差可达50℃以上，对于珍贵的细胞样品存储来说并不是一个好的选择。
存储样本量：
3024~38350个2ml 冻存管
▲ Origin系列
传统气相存储的气相罐-Origin系列
气相罐则一开始就采用了气相存储设计理念，无论是专门的气相托盘还是缩小的罐口直径设计，都为气相罐提供了许多优点。
与液氮箱相比，气相罐的液氮消耗量更低、罐口温度更低(-190℃)、温度均一性好。
存储样本量：
19500~93000个2ml 冻存管
▲ Polaris系列
干式存储的气相罐-Polaris系列
干式存储的气相罐在传统气相罐的基础上更进一步，采用液氮夹层设计，不仅仅是底部有液氮，存储腔的侧面也有液氮(-190℃)，提供了更佳的温度均一性，守护珍贵的样品。
存储样本量：
5200~94500个2ml 冻存管
Q
5. 液氮存储容器的维护成本
A
液氮罐实际使用时，每天的液氮损耗：
=罐体静态蒸发量+开盖蒸发量+供给罐传输蒸发量+供给罐静态蒸发量
液氮箱购买时价格低于气相罐，但是由于设计原因，实际存储时，液氮的使用成本远远高于同等体积的气相罐(约5倍)。目前市场上气相罐和液氮箱的购买比例为10：1。对于珍贵的细胞样品来说，干式存储的气相罐是值得信赖的选择。
【客户案例】
▲ UK Biocentre中的42台Polaris 94
参考资料
The UK Biobank sample handling and storage protocol for the collection, processing and archiving of human blood and urine | Request PDF (researchgate.net)
Clinical Review Memo, March 26, 2021 - ABECMA (fda.gov)
August 30, 2017 Summary Basis for Regulatory Action - KYMRIAH (fda.gov)
Liquid Nitrogen Storage of Hybridoma Cells - PubMed (nih.gov)
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