TTC法根系活力的测定实验
01原理
氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质。溶于水中为无色溶液,但还原后通过下列反应,生成红色而不溶于水的三苯基甲臢。反应式如下:
生成的甲臜呈稳定的红色,不会被空气中的氧自动氧化。所以TTC被广泛地用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到加强;而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制。所以,它能够测定脱氢酶的活性。由该酶活性表示根系活力。
02
材料与仪器
水培或砂培的玉米或小麦根植物材料(需洗净)
美析UV-1500PC紫外分光光度计
玉米小麦根
乙酸乙酯 连二亚硫酸钠 1%TTC溶液
0.1M pH7.5磷酸缓冲液 2N硫酸
温箱研钵漏斗移液管容量瓶
03
实验步骤
TTC标准曲线制作:
取0.2 ml 0.5%的TTC溶液加入到10 ml 具塞刻度试管中,再加入少许Na2S2O4粉末,摇匀后即产生红色的甲臜。再用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀。然后分别取此液0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml 至10 ml 具塞刻度试管中,以乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲臜 0.025、0.05、0.10、0.15、0.20毫克的标准比色系列。以空白作参比,在485nm0波长下测定光密度,绘制标准曲线。
04
定性测定方法
取样品0.25g放入三角瓶,加入0.5%TTC溶液和0.1 M 磷酸缓冲液(pH7.5)各5 ml 充分混匀,并将根尖完全浸入在溶液中,至37℃保温箱内1小时,保温时间一到立即加入2N H2SO4溶液2 ml 以终止反应。如根尖显红色表明该处具有活跃的脱氢酶存在。
05
定量测定方法
取出定性显色的根段,用滤纸吸干外附水分,至研钵中,加乙酸乙酯3-4 ml 研磨。将提取的红色TTF小心倒入刻度试管中,残渣用乙酸乙酯冲洗2-3次,直至洗液不带红色为止,全部洗液合并于试管中,最后用乙酸乙酯定容至10 ml ;摇匀后,以乙酸乙酯为对照于485n M 下比色,记录光密度值。查标准曲线,即可求出TTC还原量。
06
仪器特点
*采用单片微机控制,128*64位液晶显示
*宽大的液晶显示器可显示多组数据*巨大的内存空间,可存储多组数据和曲线*自动调0、调100%功能*波长自动调节*光源自动切换,滤色片自动切换*宽大样品池(5mm~100mm)*具有最多十点标样建标准曲线测量功能*可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量*可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量*可断电保存测量设置的标准曲线参数*配备通用并行打印接口,可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线*配USB接口*可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求(UV-1500选配,UV-1500PC标配)
07
关于美析
上海美析仪器有限公司(以下简称美析),是一家具有自主知识产权的高新技术企业,美析的创业理念“科技——因你改变”,并以此为企业宗旨,不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域,不断开发出先进的产品,使美析成为优质仪器资源的供应者。
美析主营光谱类仪器:可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、原子荧光光度计、ICP-AES、ICP-MS,生命科学仪器:超微量分光光度计、全自动核酸提取仪,目前,我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验,结合市场的最新实际需求,近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。