前言
随着我国中医药产业的快速发展,中药材与饮片使用人群范围日益扩大,市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等,给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战,保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此,中药材与饮片微生物污染问题不容忽视,特别是在生产以及加工储运过程中,如不采取有效措施加以控制,极易造成外源微生物的污染,其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素,导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患,给临床使用带来安全性问题。
展青霉素是一种遗传毒性化合物, 具有潜在的细胞和动物毒性, 存在致畸性、致癌性和免疫毒性,是多种真菌的次级代谢产物, 广泛存在于多种植物作物及其制品中,所以展青霉素的残留问题已引起世界卫生组织的高度关注, 对其最低限量做了严格规定。
本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的展青霉素测定法,对常用中药(人参、枸杞、大枣)的展青霉素进行提取,用MultiVap-10定量平行浓缩仪对样品进行浓缩,并用MiniLab3000全自动液体样品处理平台配制标准曲线,采用LC-MS检测,建立了一套中药的展青霉素处理检测方法,此方法回收率及平行性良好,标准曲线R2>0.999,加标回收率为71.4%~91.7%,重复性RSD为5.0%~5.7%,满足检测要求。
关键词:MultiVap-10 2020版《中国药典》 展青霉素 2351通则 MiniLab3000
1.仪器设备及试剂
1.1 仪器设备
1.1.1 MultiVap-10定量平行浓缩仪(莱伯泰科公司);
1.1.2 SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统(SCIEX中国公司);
1.1.3 MiniLab3000全自动液体样品处理平台(莱伯泰科公司);
MultiVap-10定量平行浓缩仪
MiniLab3000全自动液体样品处理平台
1.2 试剂及耗材
1.2.1 甲醇(色谱级);
1.2.2 乙腈(色谱级)
1.2.3 蒸馏水;
1.2.4 展青霉素净化柱;
1.2.5 展青霉素标液(购自坛墨质检);
1.2.6 氯化钠;
1.2.7 无水醋酸钠;
1.2.8 无水硫酸镁;
1.2.9 果胶酶(活性大于1500IU/g);
2.试验方法
2.1 样品处理
分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验,取供试品粉末约5g(过二号筛),精密称定,加入水20mL和果胶酶75μL,混匀并40℃放置2h,精密加入乙腈60mL,均质2min(11000r/min),离心10min(4000r/min),取上清液20mL,加入无水醋酸钠∶无水硫酸镁(1∶4)3g,充分振摇2min,离心10min(4000r/min),取上清液8mL,通过展青霉素净化柱,收集净化液,取5mL净化液放入MultiVap-10定量平行浓缩仪中,按40℃、2psi条件进行氮吹浓缩至0.5mL以下,加2%乙腈溶液(乙酸调pH至2)定容至1mL,用0.22μm滤膜过滤,待测。
2.2 基质加标回收率实验
标准曲线配制:取展青霉素标品母液至MiniLab3000全自动液体样品处理平台上,按图1方法配制标曲。
图1 MiniLab3000全自动液体样品处理平台展青霉素标曲配制流程
按2.1方法准备样品,进行加标实验,按药典所规定的检出限展青霉素12μg/kg进行加标及前处理实验,同时进行3个平行样品,用来测定加标回收率及平行性。
2.3 LC-MS分析条件2.3.1 液相色谱条件
色谱柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);
流动相:A: 水;B: 乙腈;
流速:0.3 mL/ min;柱温:25℃;进样量:5 μL;
洗脱梯度:0~0.5min,20%B;1min,40%B;4min,75%B;4.1~5min,95%B;5.1~6.5min,20%B;
2.3.2 质谱条件
离子源:ESI源,MRM模式,正离子模式;
离子源参数:
IS电压:5500V 气帘气CUR:35 psi;
雾化气GS1:55 psi 辅助气GS2:60 psi;
源温度TEM:550 ℃ 碰撞气CAD: 9 psi;
3.结果和讨论
3.1样品色谱图
图2 基质加标LC-MS MRM总离子流色谱图(正离子模式)
3.2 标准曲线
按2.3中的配制的不同浓度标液计算得出展青霉素(以相对峰面积和浓度作标准曲线) 的线性方程、相关系数,见图3。
图3 展青霉素LC-MS法标准曲线
3.2 加标回收率
加标样品经前处理后,分别进行LC-MS分析、定量,计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。
表1展青霉素LC-MS法加标回收率
4.结论
由图3、表1可知,2020版《中国药典》2351通则中展青霉素的标准曲线R2>0.999,加标回收率为71.4%~91.7%,重复性RSD为5.0%~5.7%,满足检测要求。
综上所述,莱伯泰科MultiVap-10定量平行浓缩仪及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求,适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的展青霉素测定,适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。
参考文献:
[1] 江曙,杨美华,段金廒,钱大玮.展青霉素研究现状及其对中药安全性的影响[J].南京中医药大学学报,2010,26(05):398-400.
[2] 中华人民共和国药典2020年版. 四部[S].2020: 30ChP 2020. Vol Ⅳ[S]. 2020: 30.
关于莱伯泰科
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