背景
自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，木香药材由于富含挥发油成分较多，基质效应较为严重，药典规定的4种前处理方法都难以解决。
纳谱分析根据挥发油成分特点，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数，特别推出SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱（200mg/6mL）产品。相比市面上常规HLB产品，HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。
本次，我们来看看木香项目的前处理效果。
★
适用范围
★
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。
★
实验步骤
★一
对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；
1 .2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份），置氮吹仪上，40°C 水浴浓缩至约0.6mL，分别加人混合对照品溶液l0μL、20μL、50μL、100μL、150μL、200μL，加乙腈稀释至lmL，涡旋混匀，即得。
二
供试品溶液的制备
2.1 提取
称取5g木香样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至10mL，摇匀，待净化。
三净化
SPE柱：SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱（200mg/6mL）/ SelectCore HLB固相萃取柱（200mg/6mL）
净化：量取直接提取法制备的供试品溶液3mL，过SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得；（同法用SelectCore HLB固相萃取柱进行平行试验）
GC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3 mL内标溶液，混匀，过PTFE膜，上机分析。
LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3 mL水，混匀，过PTFE膜，上机分析。
四
高效液相色谱-串联质谱法
（岛津 LC-MS 8050）
色谱条件
色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)
流动相：
A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）
B：乙腈/0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L 甲酸铵）=95/5
梯度：
时间（min）
流速
（mL/min）
流动相A
（%）
流动相B
（%）
0
0.3
70301
0.3
703012
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
703016
0.3
7030
流速: 0.3 mL/min
柱温: 40 ℃
进样量: 1 µL
质谱条件
离子源: 电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描
监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）
离子源接口电压：4.5kV
雾化气：氮气3.0L/min
加热气：干燥空气10.0L/min
DL温度：250℃
加热模块温度：400℃
接口温度：300℃
干燥气：N2 10 L/min
图1：ChromCore C18-MS Pesticides 色谱柱30种农药标准品（以甲胺磷计0.025 μg/ml）的典型谱图
图2：木香空白基质加标的典型谱图（SelectCore HLB-A净化）
图3：木香空白基质加标的典型谱图（SelectCore HLB净化）
从以上木香基质加标LC/MS/MS图对比来看，HLB-A处理后的加标样品中部分农残成分的响应值更大，让分析检测结果更为准确。
五
气相色谱-串联质谱法
（岛津 GC-MS 8030）
色谱条件
色谱柱：DB-17MS，30m×0.25mm，0.25μm;
进样口温度：250℃；
升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；
载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；
进样方式：不分流进样；
恒压模式：146kPa；
进样量：1μL。
质谱条件
电离方式：电子轰击电离源（EI）；
电离能量：70Ev；
传输线温度：250℃；
离子源温度：250℃；
监测方式：多反应检测模式（MRM）；
溶剂延迟：10.0min。
表1 木香中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）
农残成分
回收率
农残成分
回收率
甲胺磷
87.9%
甲磺隆
96.1%
甲基对硫磷
75.1%
氯磺隆
102.3%
对硫磷
63.4%
胺苯磺隆
95.5%
久效磷
99.8%
甲拌磷
101.1%
磷胺
100.2%
甲拌磷砜
95.8%
α-六六六
92.4%
甲拌磷亚砜
98.9%
β-六六六
110.2%
甲基异柳磷
88.2%
γ-六六六
90.5%
内吸磷-O
94.3%
δ-六六六
63.4%
内吸磷-S
89.4%
2,4''-滴滴涕
64.1%
克百威
96.8%
4,4''-滴滴滴
69.8%
3-羟基克百威
104.9%
4,4''-滴滴涕
63.5%
涕灭威
90.3%
4,4''-滴滴伊
66.1%
涕灭威砜
96.0%
杀虫脒
84.7%
涕灭威亚砜
104.0%
除草醚
83.3%
灭线磷
85.2%
艾氏剂
80.5%
氯唑磷
80.0%
狄氏剂
76.7%
水胺硫磷
70.5%
苯线磷
79.8%
α-硫丹
94.5%
苯线磷砜
89.2%
β-硫丹
76.2%
苯线磷亚砜
90.8%
硫丹硫酸酯
89.3%
地虫硫磷
66.4%
氟虫腈
97.9%
硫线磷
76.4%
氟虫腈砜
101.0%
蝇毒磷
93.8%
氟虫腈亚砜
103.2%
治螟磷
81.5%
氟甲腈
97.9%
特丁硫磷
80.3%
o,p''-三氯杀螨醇
90.7%
特丁硫磷砜
88.9%
p,p''-三氯杀螨醇
71.3%
特丁硫磷亚砜
102.8%
硫环磷
96.6%
甲基硫环磷
98.7%
__
注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5mL样品过柱）。
六
处理后溶液的颜色比对
木香提取液过HLB-A柱
木香提取液过HLB柱
由上图可以看出，木香提取液经过SelectCore HLB-A中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB柱净化后样品颜色较深。
七
木香过HLB与HLB-A SPE柱的
部分农残基质响应的区别
（左边为HLB，右边为HLB-A）
甲拌磷砜
特丁硫磷砜
地虫硫磷
八
实验讨论
木香主要含挥发油类、内酯类等成分，尤其是挥发油类成分，对于实验干扰较大。通过以上实验数据比对，可以看出，SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱，针对木香的挥发性成分去除效果良好，极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降、峰形不佳等问题，尤其对有机磷类农残成份的检测准确性提升较明显，其指标均能满足药典要求。并且该方法操作方便，不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定。
中药农残相关实验耗材：
试用方法：
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