在工作中,我们经常会收到来自“四海八荒”朋友们的技术问题,在使用色谱柱的过程中有时会遇到一些问题,例如:压力高、压力低、不出峰、漏了、飘了……等等。
案件概述
天津某公司实验室的李女士,新买的色谱柱初次使用,就出现了异常峰,干扰检测,进空白溶液进行排查,发现空白溶液也出现了异常峰,怀疑此款色谱柱存在质量问题!严谨专业的我们,逐一排查可能的原因,洗脱了色谱柱不合格的“嫌疑”,想了解案情吗?且听小编娓娓道来。
案件分析
色谱条件:
Column: ChromCore 300 C4, 5 μm
Dimension: 4.6×250 mm
Mobile Phase:A) 0.05% 三氟乙酸水
B) 甲醇
Gradient: t(min) %A %B
0 90 10
5 30 70
15 5 95
25 5 95
Flow Rate: 1.0 mL/min
Temperature:30 ℃
Detection: UV 250 nm
根据李女士的描述,我们怀疑异常峰来源有两个地方:
1、系统污染;
2、梯度鬼峰。
使用李女士反馈异常的色谱柱,按照其提供的色谱条件,进空针(进样器不动作),来排查是否是系统的污染,测定效果如下:
进空针(进样器不动作)时测定效果图谱
初步怀疑是运行梯度产生的梯度鬼峰,然后通过添加NanoChrom Ghost-Remover鬼峰去除柱进一步排查,结果如下:
添加鬼峰去除柱后的对比效果图谱
(图源于网络)
结果:添加NanoChrom Ghost-Remover,2.1×50mm鬼峰去除柱,所有异常峰均消失,基线正常。而添加NanoChrom Ghost-Remover,4.6×50mm鬼峰去除柱出现的基线波动,是因为0~5min梯度变换较大,造成的基线异常。因此,需根据具体的色谱条件,选择合适的鬼峰去除柱。
案件总结
值得注意的是,鬼峰现象大多由不洁流动相引起,在使用任何色谱柱时(无论新旧)都有可能遇到,尤其在使用了缓冲盐或酸性添加剂进行梯度分析时,更易出现鬼峰从而干扰微量或者痕量物质的分离或者定量。方法开发中一旦出现鬼峰,消除鬼峰则需要花费分析人员较多的时间和精力,也是一项非常棘手的工作。
鬼峰小柱可以有效去除流动相中的杂质,彻底清除鬼峰,从而大大缩短了方法验证和微量、痕量物质分析的时间。尤其对于药物分析研发人员而言,NanoChrom Ghost-Remover鬼峰去除柱是您必备的鬼峰消除神器。
NanoChrom Ghost-Remover鬼峰去除柱
应用案例:
◇ 鬼峰去除柱应用实例
(NanoChrom Ghost-Remover,4.6×50mm)
安装方法:
鬼峰去除柱保存在纯甲醇中,使用前采用纯甲醇1.0 ml/min流速冲洗20 min,(注意:不要连接色谱柱和检测器进行冲洗)冲洗好后卸下小柱,按照示意图安装位置,连接到混合器与进样器之间。
Ghost-Remover鬼峰去除柱的主要特点是能去除溶剂包括有机溶剂中的杂质。反相色谱梯度分析时,将小柱安装在梯度混合器和自动进样器之间,不仅能够去除流动相中的杂质,还可以有效管路和混合器中的杂质。
使用寿命:
考察未加去除柱与加去除柱的结果相比,使用去除柱可以有效去除鬼峰。
经过600次分析之后,仍然没有鬼峰出现。实验结果表明, 捕集柱可以稳定吸附杂质,并对多次分析有足够的负载容量。
使用说明:
◇ 该产品实际寿命依据分析条件例如使用的流动相不同而有所差别,并不是所有的杂质都可以被清除。◇ 将该产品连接在梯度混合器或泵的汇合处之后,梯度分析将存在和小柱容积等同的延迟体积,几乎所有品牌液相仪器都可使用本产品。当将质谱作为检测器时,该产品可能会有少许溶出引起基线噪声。◇ 在分析中如果使用离子对试剂时,该产品可能会吸附离子对试剂影响组分的保留时间或者峰型。◇ 在连接分析柱之前,务必用流动相彻底冲洗连接该产品的管路(接近梯度分析中的最终浓度)。
“ 那么,鬼峰去除柱的规格应怎么选呢?
答:需根据具体的色谱条件,选择合适的鬼峰去除柱。当梯度变换较大或者所使用的色谱柱体积较小时,可以优先考虑选择纳谱分析的NanoChrom Ghost-Remover (2.1×50 mm)柱。
相关产品信息
产品描述
货号
NanoChrom Ghost-Remover, 4.6×50mm
GR4605S
NanoChrom Ghost-Remover, 2.1×50mm
GR2105S
本期的内容就分享到这里,想了解更多关于色谱柱方面的内容,可联系纳谱分析,我们将竭诚为您服务。
纳谱分析可提供色谱柱免费试用,具体申请方法如下: