随着全球基因治疗市场的高速增长，腺相关病毒（AAV）已成为基因治疗领域最重要的基因载体之一，其具有能长期表达、毒性低、免疫原性低、组织特异性高等优势。作为一种复杂的蛋白质，AAV衣壳可以表现出多样化的聚集特征，聚集体也是其关键质量属性，针对这一需求，沃特世推出全新XBridge™ Premier GTx BEH™ SEC 450 Å 2.5 μm色谱柱，用于基因治疗 (GTx) 和AAV药物开发。
XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm色谱柱采用Premier柱管，可以减少样品吸附损失，提高样品的回收率和方法的重现性，使平台方法的建立更加简单可行。
实验条件
液相色谱系统：ACQUITY H-Class Bio Plus（四元）
检测器及检测波长：FLR（激发280 nm，发射350 nm）；TUV（260 nm或230 nm）
进样瓶：QuanRecovery 样品瓶
色谱柱：XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm 4.6 x 150 mm
保护柱：MaxPeak Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm 4.6 x 30 mm 保护柱
流速：0.25 mL/min；
柱温：25℃；
样品温度：6℃；
进样量：1 μL；
流动相：10 mM K2HPO4，用HCl调整至pH 7.4，200 mM KCl.
减小粒径提高分离度
在相同的条件下，通过对比XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm色谱柱和PEEK Hardware 5μm Silica 500 Å对HMWS的分离情况，发现AAV主峰的USP塔板数更高，多聚体有更高的分辨率，XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm 色谱柱的AAV分离效率是5 μm粒径色谱柱的4倍。
Premier技术减少柱管吸附
传统的不锈钢柱管会与分析物产生次级作用。在相同条件下，通过比较硅胶5 μm不锈钢色谱柱与HPS 2.5 μm色谱柱（XBridge Premier色谱柱）对AAV2样品的分析，发现传统的不锈钢色谱柱（5 μm silica 500Å）无法检测到聚集体，而XBridge Premier色谱柱分离出了HMWS且回收率好。
提高分析通量
在实验中分析了各种血清型AAV，每种AAV中聚合物的占比相近时，PEEK Hardware分离不同AAV的聚集体的占比需要50分钟，但XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 µm可以在更短的时间内分析各种血清型AAV，0.6 mL/min 的最大推荐流速时分析时间为5分钟，分析时间缩短了10倍。
专门设计保护柱提高耐用性
使用保护柱能延长色谱柱使用的寿命，提高分辨率，对于聚合物的含量测定与不加保护柱的结果一致。
结果
XBridge Premier GTx BEH 450 Å 2.5 μm色谱柱采用2.5 μm BEH颗粒和亲水MaxPeak Premier HPS技术，在分析AAV载体含量/纯度时提供了更高的分辨率。其运行速度快，且低吸附柱管设计能够降低离子次级相互作用，有效分离各种AAV血清型。 同时，通过增加方法的流速，可以在不损失分辨率的情况下将分析时间加快十倍。最后，保护柱可延长分析柱的使用寿命并保持更好的性能，实验证明使用保护柱不影响结果，与AAV分析兼容。
更多应用分享
色谱柱使用和维护手册
使用XBridge Premier GTx BEH SEC 450Å 2.5μm色谱柱改进的腺相关病毒（AAV）体积排阻色谱
使用XBridge Premier GTx BEH SEC 450 Å 2.5 μm色谱柱通过SEC-MALS增强AAV的表征
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