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“飞”凡创新季-SuperScript IV 反转录家族再添新成员, 将cDNA合成进行到底

赛默飞生命科学小助手
2023.8.21

为了研究RNA的功能,通常需要通过反转录将RNA转化为更稳定的cDNA,之后再通过克隆、PCR和测序等技术进行深入研究。因此,反转录是许多RNA研究实验流程的关键步骤。

超过50000次的文献引用,Invitrogen™ SuperScript™ 反转录酶是第一链cDNA合成领域中值得信赖和广泛使用的产品。我们同时也在不断推陈出新,开发出一系列SuperScript IV反转录产品,用于不同的研究应用领域。

RT-PCR

在RT-PCR中,首先将RNA反转录为cDNA,然后通过PCR扩增cDNA。利用cDNA扩增步骤,有望对初始RNA进行进一步研究。RT-PCR的常见应用包括分子克隆、表达基因检测、转录物变异检测,测序模板制备等。

一步法RT-PCR和两步法RT-PCR是两种最常用方法。顾名思义,一步法RT-PCR在单个反应管中将第一链cDNA合成和后续PCR反应结合在一起。相比两步法RT-PCR,一步法RT-PCR实验流程更简单快速,污染风险更低,也更适合高通量实验应用。

当季上市新品

Invitrogen™ SuperScript™ IV UniPrime™ 一步法RT-PCR系统提供方便的一步法RT-PCR方案。其将高持续合成能力的反转录酶、高保真度的DNA聚合酶与创新型缓冲液结合在一起,让一步法RT-PCR更佳高效和方便。

亮点1

可使用通用引物退火温度

创新型缓冲液中包含共稳定分子,可加强引物和模板的结合。对于不同引物,不再需要使用Tm计算器计算引物的解链温度,所有引物均可使用60°C的通用引物退火温度,减少反应优化过程。

亮点2

颜色指示

RT和PCR缓冲液中包含不同染料,当混合时会发生颜色变化。所以可通过颜色变化直观查看加样情况,避免加样失误。同时反应后可直接上样进行电泳,无需单独添加上样染液。

亮点3

增强的多重扩增能力

由于具有高特异性、高持续合成能力以及使用通用退火温度等特点,SuperScript IV UniPrime一步法 RT-PCR系统可成功扩增出多重靶标,且无需太多的反应优化。

针对不同起始量的RNA样本进行多重RT-PCR检测。从0.1–1,000 ng的UHRR中扩增10个靶标(101、131、199、301、346、399、498、613、734和1,006 bp)。

亮点4

室温下的高稳定性

借助RT和PCR两阶段的热启动激活机制,可实现反应的高特异性和室温下的高稳定性。当靶标≤3 kb,配制好的反应体系可在室温下放置长达24小时;当靶标>3 kb,可在室温下放置长达4小时,因此可兼容高通量实验应用。

室温下的长时间稳定性。使用SuperScript IV UniPrime一步法RT-PCR系统,针对(A)0.001–1 ng UHRR的1 kb RNA靶标和(B)0.1–1,000 ng UHRR的4.5 kb RNA靶标配制RT-PCR反应体系。将配制好的反应体系立即放入热循环仪中开始反应,或在扩增前在室温下放置(A)24小时和(B)4小时。结果显示,即使在室温下长时间放置后,仍可进行高效和高特异性的靶标扩增。

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