做荧光定量 PCR(qPCR)实验时
你是否也有过这样的疑问:
ROX要不要添加,倒底应该加多少?
ROX的作用原理
ROX是一种惰性参比染料,“惰性”的意思是,不论PCR扩增循环数如何增加,ROX的荧光信号依然稳定如初。
实验中经常会出现一些物理因素的干扰,如加样孔中的气泡、qPCR 管盖的厚度差异以及 qPCR 仪本身的光程差等,这些都会导致SYBR Green荧光信号强度的变化。为了校正误差,在qPCR反应体系中加入等量的ROX,利用每个反应体系中的惰性染料ROX荧光强度做为矫正基准,对SYBR Green的荧光强度进行归一化处理,来修正 SYBR Green 荧光信号强度,保证实验结果的准确性。
ROX的使用建议
那么,不同qPCR仪需要添加多少ROX呢?有的仪器不需要加入ROX,如TGreat Real 96荧光定量PCR仪、Roche、Bio-Rad等;有的则需要添加,如 ABI、Agilent Stratagene 等。不同仪器需要加入的ROX浓度也各有不同。
我们以TIANGEN定量明星产品FastReal 快速荧光定量PCR预混试剂 (SYBR Green)(目录号: FP217)为例,详细列出了不同仪器的ROX添加量。
不同qPCR仪器的ROX添加量
FastReal 快速荧光定量PCR预混试剂
(SYBR Green)(目录号FP217)
助你快速高效完成荧光定量实验
扩增曲线起峰早,荧光值高,特异性强
可兼容快速和普通qPCR仪
透明试剂管,方便观察试剂余量
实验例