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环境微生物核酸提取新时代!一键破解提取难题!

TIANGEN
2024.5.07

“近年来,随着生物技术的飞速发展,环境微生物的研究和应用取得了长足进步,如在废水处理、土壤修复、生物农药和生物肥料的生产方面都取得了显著成效[1]。同时,环境微生物在新药、酶制剂和生物材料的开发上发挥了重要作用,为可持续发展做出了重要贡献[2]。

核酸提取作为环境微生物学研究的基础,它直接决定了后续分子生物学分析的准确性和可靠性。但面对复杂多样的环境样本,如何高效、准确地提取微生物核酸仍是科研人面临的一大挑战。

环境微生物核酸提取难点解析

样本复杂性

环境样本中微生物种类繁多,不同微生物的核酸含量、结构等差异较大,使得提取过程难以统一。

细胞壁结构差异

不同微生物的细胞壁结构不同,如G+、G-和真菌在细胞壁成分和厚度方面具有明显差异,裂解不充分可能使核酸提取出现偏好性,因此要选择适当的裂解方法以有效释放核酸[3]。

抑制剂干扰

环境样本中常含有腐殖质、色素等杂质,如土壤中的腐殖质、水体中的盐分等,这些物质会干扰核酸提取纯化和后续的检测分析[4]。

操作繁琐

传统的核酸提取方法通常涉及多个步骤,操作繁琐,易引入污染,影响提取效果。

环境微生物

自动化核酸提取解决方案

TIANGEN凭借多年的核酸纯化经验,针对环境微生物核酸提取难题,整合了高通量研磨均质仪、全自动核酸提取纯化仪及其配套试剂,创新性地推出了一套高效且精确的核酸提取方案。该方案能轻松应对各类环境样本,高效提取微生物基因组DNA,显著提升提取效率和产量。提取出的核酸可直接用于PCR、建库、测序等分子生物学实验。

样本前处理

Sample Pre-processing

◆ 均一性好:三维∞字振动模式,研磨效果更均一。

◆ 得率高:提供最适研磨方案,研磨更充分,实验结果得率高。

◆ 通量高:1-24个样本同时研磨,通量大,效率高。

◆ 适用性广:可处理各种样本,包括土壤、粪便、水体、细菌、真菌等。

核酸提取纯化

Nucleic Acid Extraction & Purification

◆ 高效便捷:磁珠法全自动化提取1-8或16个样本,一键运行,省时省力。

◆ 稳定均一:自动化操作稳定性好,实验结果可重复性高,均一性好。

◆ 得率高:预分装研磨珠配合高效裂解液,可裂解多种复杂成分,保证微生物多样性及得率。

◆ 纯度高:独特的脱腐殖酸缓冲液可有效去除腐殖酸等抑制物,获得高纯度DNA。

◆ 通用性广:独特的样本破碎与裂解体系,适用于各种样本,覆盖多种微生物类群。

实验案例

Experimental Cases

可有效提取多种环境样本基因组DNA

使用TGuide S16核酸提取纯化仪搭配DP613和竞品(国际知名品牌 A、B)分别提取各类样本的基因组DNA,电泳结果显示,DP613提取效果较好。

16s区域可有效检出

将使用TGuide S16核酸提取纯化仪搭配DP613和竞品(国际知名品牌 A、B)提取小鼠粪便、竹林土+红茶粉样本得到的微生物基因组DNA,用细菌16s引物(V3-V4)进行PCR检测,电泳结果显示,DP613与竞品提取的核酸进行16s扩增均可有效检出。

ITS区域可有效检出

将使用TGuide S16核酸提取纯化仪搭配DP613和竞品(国际知名品牌 A、B)提取池塘淤泥、竹林土+红茶粉样本得到的微生物基因组DNA,扩增ITS区域(ITS1)进行PCR检测。电泳结果显示,DP613与竞品提取的核酸进行ITS扩增均可有效检出。

抑制物残留低,可进行后续实验

使用TGuide S16核酸提取纯化仪搭配DP613和竞品(国际知名品牌 A、B)提取的核酸原液作为PCR的抑制物,加入到qPCR体系中检测已知浓度的质粒,判断提取产物对PCR实验的抑制性。结果表明,DP613提取的核酸,PCR的抑制物与竞品A相当且明显优于竞品B,几乎不影响定量PCR反应。

适用于微生物群落分析

使用TGuide S16核酸提取纯化仪搭配DP613、竞品(国际知名品牌 A、B)提取微生物群落标准品(Zymo-D6300)基因组DNA,然后进行16s测序,分析各菌属水平检测的Tags比例。每个试剂盒进行两次平行实验。结论:DP613提取的微生物基因组DNA,8个细菌微生物均被检出,与标准品的混合比例类似。

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参考文献

1.马挺, 蒋建东. 新时代下的我国环境微生物学研究[J]. 微生物学通报, 2023, 50(4): 1371-1373.

2.陈良燕. 国内外转基因微生物研究与环境释放现状综述[C]. //中国国家生物安全框架实施国际合作项目研讨会论文集. 2002:100-111.

3.马睿, 陈建徽, 刘建宝, 袁艳丽, 周爱锋, 丁国强, 湖泊沉积物DNA在气候环境变化和生态系统响应研究中的应用. 湖泊科学, 2021, 33(3): 653-666. DOI: 10.18307/2021.0303.

4.李超,梁俊峰.土壤微生物总DNA提取及其PCR优化[J].桉树科技,2015,32(02):17-21.DOI:10.13987/j.cnki.askj.2015.02.003.

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