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1 Empower软件导出图谱
进入Empower系统,点击浏览项目,进入项目文件夹,点击菜单栏File→New Method→Export Method
进入方法界面,如下,勾选AIA,并选择导出数据文件夹
将该方法保存,例如,保存方法名称为export method。
1.2 导出数据
进入通道或结果界面,选择目标数据,右击选择Export
选择导出方法(选择已新建的方法,例如export method),点击OK,数据导出到目标文件夹,具体保存数据路径为新建方法中AIA格式选择的路径。
导出数据在ACD软件下显示格式如下:
2 ACD软件标峰
选择ACD软件中Spectrus Processor,选择上述导出数据所在文件路径,可选择单个或多个AIA数据文件;
打开数据文件后,选择合适的积分方式进行积分(自动积分是对所有较明显的峰进行积分,若要除去部分不需要积分的峰,选择手动积分,单击目标峰即可删除。设定基线积分是根据需要设定一定的基线高度进行积分),显示如下:
积分完成后,选择菜单栏View→Tables→Peaks,会显示出标峰对话框,如下图所示:
对话框中会显示峰名称、保留时间、峰面积、峰面积百分比、峰宽、对称性、分离度等信息,双击Name即可修改峰名称,修改名称后对话框如下:
注:当一个峰里面包裹了2个杂质,峰命名的时候需要使用A + B的形式,加号两边必须留一个空格,否则软件不能识别出2个杂质;
峰命名完成后,选择Edit/Show Chromatogram Parameters进入方法参数设置,弹出HPLC Parameters对话框,对每张图谱进行梯度、柱温、流速、流动相pH等参数设置
按实际运行方法进行设置,设置完成后对话框如下:
方法参数设置完成后,点击File-Save,保存标峰完成的图谱。数据格式如下:
3 ACD软件模拟
点击control,在processor界面选中已完成标峰的需要进行模拟的所有数据,选择菜单栏中黑色三角按钮,选择Transferto LC Simulator
根据需求选择模式(可以单因子或二因子建模,前提条件是每个条件需要至少2组数据),弹出数据整合对话框;
该界面下所有峰原始信息均可以根据需求进行调整,例如可以适当将峰宽修改变大或者将峰面积修改变小,然后在对话框内选择HPLC Parameters输入合适的仪器参数“Dwell Volume”和色谱柱参数“Observed t0”、“at a flow Rate of”,“Dwell Volume”输入数值应小于“Observed t0”和“at a flow Rate of”相乘的结果。
设置完成后点击OK,弹出ACD软件模型界面
点击Generate Methods→Suitability Options进行参数设置,输入目标需求,其中Suitable K’=t0+1.5t0,Minimal K’=t0+t0
通过调整梯度可以看到梯度(或柱温、流速等其他色谱参数)的优化空间,选择最优的条件,进行实验确认
点击菜单栏上File→Save保存该模型。