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PCR实验污染来源有哪些?

基泰生物
2022.4.13
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上海基泰生物科技有限公司

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PCR实验污染来源有哪些?


目前处于上海防疫至关重要的阶段,我们也希望能够尽快结束这场战疫。

对于需要24小时轮转的PCR实验室,我们非常感谢一线人员不断付出和坚持,今天来看看PCR实验室可能的污染来源。

01

样本间交叉感染:

收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。 

02

实验试剂污染:

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中,因为PCR试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃,但这个过程也充满污染风险。

03

扩增产物污染:

大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是PCR反应中最主要、最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。

04

克隆质粒污染:

作为阳性质控品的克隆质粒外溢。 E

PCR实验室污染应急处理方法
01

若核酸样本溢出:

立即用布或纸巾覆盖,由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂,约30分钟后,清除污染物品,再用次氯酸消毒剂擦拭,并用75%酒精喷洒,移动紫外车定点照射1小时。

02

其他不明情况污染:


1、暂停所有实验操作;

2、清理实验室内所有物品,寻找污染来源;

3、加大实验室的通风;

4、对实验室内所有表面(台面、地面及墙面) 进行消毒;

5、75%酒精空中喷雾;

6、开启紫外消毒装置,延长紫外照射时间(4小时以上);

7、以上措施每日进行,直至污染消除;用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测,连续3次均阴性后方可进行常规检测。

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