在细胞治疗生产工艺环节，液体置换或细胞洗涤是高频使用的操作，甚至在PBMC分离、磁珠孵育清洗、病毒离心转染、细胞收获过程中也都包含细胞洗涤的工序。最大程度去除原液残留的同时，尽可能减少细胞的丢失，而且处理时间越短对细胞活性影响越小，清洗液（或其它特定液体）消耗量少，不仅可以减轻配液的工作量，同时降低成本。听上去有些理想化？Rotea逆流离心系统一次性实现您的四个愿望！
至净
我们上期讲到，Rotea逆流离心原理是细胞在离心力和液体流动力的合力作用下，细胞在锥形离心腔液体中保持悬浮状态并形成稳定流化床，通过连续流进而温和且高效地完成液体置换、细胞洗涤、浓缩。 封闭离心方式一般需要设置intermediate volume（中间体积），无法将原液全部清除，只能通过设置多轮洗涤对残留的原液进行稀释。部分残留组分可能会影响后续工艺（如电转液置换要求不含某些离子），或者不满足法规要求。Rotea无需设置中间体积，在细胞形成稳定流化床固定在离心腔后，洗液以连续流动冲洗方式对细胞进行洗涤。下图1是Rotea换液清洗时，不同体积洗液清洗效果展示。可以看到清洗液用量达到50ml时，肉眼下基本看不见原液残留，洗液用量增加到70ml则上清完全澄清。
通过Nova Flex2生化分析仪、ELISA等技术手段，我们对原液中葡萄糖，IL-2及HSA的残留进行了定量。数据显示，清洗液用量70ml时，葡萄糖清除率高达99.79%，IL-2和HSA清除率也在97%以上。当清洗液用量145ml时，三种组分清除效率几乎都达到99%以上。通过优化流速等参数，还可进一步优化清除效率。
图1.不同体积清洗液清洗效果：70ml洗液完全置换原液
图2.不同体积清洗液对原液中各组分清除效率
至高
封闭离心法的intermediate volume（中间体积）不仅影响清洗效率，同时也影响回收率。中间体积有可设置的区间范围。想要提高清洗效率，需要设置较小的中间体积，但会伴随细胞丢失增加，回收率降低。增加中间体积，能减少每轮清洗过程细胞的丢失，提高回收率，但细胞无法得到有效清洗。
Rotea逆流离心只要细胞所受的离心力和流动力保持动态平衡，即形成稳定的细胞流化床，在离心过程基本就不会发生细胞丢失。离心力和流动力的平衡有两个关键节点：1.流化床稳定前；2.不同密度/黏度液体置换之初。流化床稳定前，离心力和流动力尚未完全平衡时，细胞进入离心腔后部分细胞会被液流带离离心腔。初始样品袋通过双管路连接形成一个内循环，流化床稳定前，从离心腔离开的细胞仍旧回到样本袋，不会流去废液袋，即可避免细胞大量丢失，保障回收率；清洗开始后，清洗液和原液之间的黏度和密度差，对流化床会有一定扰动，通过适当调整离心力和流动力，可以避免细胞的丢失，同时死的细胞或细胞碎片直接被洗液直接带入废液袋。因此通过上述精细的程序设置，无论是1L以内的小体积液体置换，还是高达5E10的大体系处理，回收率均可达90%以上。
图3.程序设定样本袋内循环来形成稳定流化床，避免细胞在流化床形成过程的大量丢失
图4.流化床形成过程：离心力和流动力平衡前，部分细胞离开离心腔，回到样品袋。随着细胞增多，流化床逐渐趋于稳定
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封闭离心法需要通过多轮洗涤达到一定清洗效率。洗涤前需要对样品进行浓缩，浓缩时间受限于离心杯体积，譬如1L的样品，若离心杯体积200ml左右，需要浓缩5次，总共耗时30-45分钟才能把所有样品收集到离心杯中。洗涤时，每一轮洗涤离心6-10分钟不等，常规洗涤3次，前后加弃上清和加液等步骤，大约需要30-45分钟，整个处理过程就需要1-1.5小时。
Rotea逆流离心系统是连续流动洗涤，处理过程也包括样品浓缩和清洗两部分。同样以1L样品为例，样品浓缩时间根据流速设置用时约15-25分钟；清洗时间取决于需要的清洗液和流速。如果按70ml洗液，30ml/min流速，清洗仅需2分钟左右。整个处理过程大概在半小时左右。
除了处理时间的优势，在清洗液的用量上Rotea也是极其“持家经济”。根据用户需求，使用70-150ml不等清洗液，加上程序开始前管路润洗消耗，1L的样品清洗大概需要200ml左右；封闭离心法，一次清洗需要约200ml洗液，三次清洗共600ml，加上管路润洗等消耗，洗涤1L细胞样品需要的洗液量是Rotea的3倍多。清洗液一般根据工艺需要会加入一定比例HSA等成分，所以使用Rotea处理细胞，不仅可以极大减少液体配置的工作量，还能减少部分物料成本。
Rotea高效快捷的液体置换功能是否可以助力解决您目前的一些工艺难题呢？如需测试体验Rotea, 您可点击下表留下联系方式，稍后会有专业人员与您联系。
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