Bigfoot高光系列应用之——全光谱高维分选小鼠干祖细胞

通过标准方法采集和制备BALB/c小鼠的骨髓和脾细胞样品。实验中所用到的流式抗体详见下表，此外染色中还分别使用Invitrogen™ eBioscience™ Flow Cytometry Staining Buffer、Invitrogen™ Super Bright™ Complete Staining Buffer和Invitrogen™ CellBlox™ Blocking Buffer以减少非特异性染色；用Invitrogen™ LIVE/DEAD™ Fixable Olive viability dye进行死活染色，最后用2%多聚甲醛进行固定。在6激光Bigfoot全光谱流式细胞分选仪上进行样本采集和细胞分选。

大部分指标用Invitrogen™ Ultracomp eBeads™ Plus Compensation Beads做补偿对照，用骨髓和脾细胞做对照的指标详见表中标黄部分。

数据结果分别用FlowJo™ v10.8.1和Sasquatch Software (SQS)软件进行分析。

表1. 小鼠造血细胞发育26色实验方案，包括抗原、抗体克隆号、染料及单阳管对照。

图1. 血细胞发育树状图。该实验成功鉴定出的细胞亚群用蓝色标记，分选出的亚群用绿色标记。

图2. 骨髓样本中排除黏连细胞、死细胞、红细胞和成熟细胞亚群后的流式结果。A) 设门策略展示。B) 细胞分选时在SQS软件中看到的2D散点图。

图3. 骨髓样本进一步排除系特异性指标后进行造血祖细胞设门。A) 设门策略展示，蓝色代表设门进度，绿色代表分选的细胞亚群。B) 细胞分选时在SQS软件中看到的散点图。C) 用于设门的FMO对照示例。

图4. 分选统计和分选后纯度检测。分选的4个细胞亚群：巨核细胞-红系祖细胞（MEP）；粒细胞-单核系祖细胞（GMP）；通用髓系祖细胞（CMP）；小前B细胞。A） 分选和丢弃的总细胞数。B）分选效率。C）GMP和 D）CMP分选纯度检测。分选纯度检测时设门策略未进行调整。

图5. 骨髓样本所有流式结果图一览。

图6. 脾细胞样本所有流式结果图一览。

我们展示了如何利用Bigfoot全光谱流式细胞分选仪成功鉴定出23个小鼠造血细胞亚群，并且高效、高纯度地分选出稀有的祖细胞亚群。

下一步研究方向：

• 拓展实验方案，增加其它指标以区分更多的细胞亚群

• 细胞直接分选至测序芯片上

Bigfoot是全球第一台全光谱、超高速、高性能的流式细胞分选仪，具有强大的光谱解析和分选能力，是免疫学研究和生物医药开发领域的强有力工具。

其主要技术优势如下：

• 配置高达9激光60参数

• 实时全光谱拆分及传统补偿调节模式可供选择

• 超高的分析和分选速度

• 强大的分选性能及灵活的分选模式

• 整合式II级生物安全柜及气溶胶管理系统

• 智能型全自动仪器校准及质控

eBioscience是全球三大知名流式抗体品牌之一，陪伴着每一代流式科学家和技术人员获得成功、共同成长！以FoxP3流式抗体为代表的产品深受广大科研人员的喜爱，全新推出的Brilliant Violet、Brilliant Ultra Violet和NovaFluor新型光谱染料标记的抗体每月上新，欢迎关注！

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