人血浆脂质组标准品是一种经过严格质量控制验证的人血浆提取脂质混合物，可用作复杂非靶向脂质组学和靶向脂质组学项目的质谱 (MS) 分析的质控样品。在分析项目正式样品之前采用脂质组标准品可随时间监测和标准化样品间的 LC/MS 性能。
氨探生物出品了人血浆脂质组标准品，该脂质组标准品是一种冻干的人血浆提取脂质混合物，可用作液相色谱 (LC) 分离、MS 方法开发和 MS 性能基准测试的质量控制标准。该标准品专为非靶向脂质组学和靶向脂质组学实验而配制，同时含有9种特定浓度的稳定同位素重标。
人血浆脂质组标准品的特点
•阳性对照样品：来自健康人血浆样品的脂质组提取物（>2,000 种二级质谱匹配成功的有效特征峰）；
• 自动化提取流程：使用自动化工作站进行脂质组样品的制备过程，以确保同批次产品的稳定性和重现性；
• 包含9种同位素重标：每份产品中都包含9种特定浓度的同位素内标，可用于产品质控，也可用于后期进行绝对定量分析（表1）；
• 严格质检：保证高质量、一致的脂质物提取流程和多重质量控制流程，通过批次特定的检验报告予以记录；
• 稳定：以最快的冷链运输、稳定的干冰环境以冻干形式低温保存。
表1.人血浆脂质组标准品中同位素内标信息表
检测模式*：C18+：在RPLC正离子检测模式下响应； C18：在RPLC正、负离子模式下都响应；
标准品生产流程
· 样品收集：收取健康人捐献血浆样品。
· 脂质组标准品生产：通过标准的脂质组学前处理方法提取出人血浆中脂质组成分，并使用固相沉淀板进行蛋白成分和微小颗粒的去除，保证脂质组标准品的洁净程度。
· 脂质组标准品保存：使用氮吹仪将脂质组标准品溶液进行吹干，将脂质组标准品冻干粉保存于-80℃冰箱中。
图1. 标准品生产和质控流程图
标准品质控流程
· 高分辨质谱质检：流动相为水/乙腈/异丙醇体系（均加入0.1% FA和2 mM甲酸铵缓冲盐），脂质物在C18柱子上分离，流速和柱温分别为0.3 ml/min和40 ℃，进样量5 µL；Thermo Scientific™ Q Exactive HF-X Orbitrap™质谱仪上选用数据依赖型采集（DDA）方式采集数据。
· 搜库参数：LipidBlast数据库使用MS DIAL v4.70 软件处理非靶向脂质组学数据，包括峰提取、对齐、注释与鉴定，严格手动检查脂质鉴定结果并逐个研究以消除假阳性，检查过程依据为峰形，加合离子行为，碎裂模式和色谱行为。
· 质控参数：获取一级、二级谱图数量、注释匹配峰信息、多重内标保留时间和含量信息，与质控参数阈值进行比对，判断生产标准品合格程度（表2）。
表2.脂质组标准品质控参数表
参数 | 质控要求 | 实验结果 | 结果 |
同位素分子离子峰数目 | POS：Molecular ion数目 ≥ 15,000 | Molecular ion数目 = 16,501 | pass |
NEG：Molecular ion数目 ≥ 10,000 | Molecular ion数目 = 11,467 | pass | |
MS/MS匹配峰数目 | POS：MS2 acquired数目 ≥ 6,000 | MS2 acquired数目 = 6,356 | pass |
NEG：MS2 acquired数目 ≥ 4,000 | MS2 acquired数目 = 4,298 | pass | |
注释匹配峰数目 | POS：Ref.matched数目 ≥ 1,200 | Ref.matched数目 = 1,496 | pass |
NEG：Ref.matched数目 ≥ 700 | Ref.matched数目 = 773 | pass | |
稳定同位素内标 | POS：8种同位素内标，Intensity ≥1E6 | POS：8种同位素内标，Intensity ≥3E6 | pass |
NEG：5种同位素内标，Intensity ≥1E6 | NEG：5种同位素内标，Intensity ≥1E6 | pass |
重现性评价
随机选取三份脂质组标准品按照说明书选择特定体积的复溶溶剂进行冻干产品的复溶，然后在高分辨质谱上进行了三次检测以评估标准品生产流程的可重复性。如下图2A-B-C所示，三次重复检测出的分子离子峰数量分别为16,550(POS)、11,340(NEG)种，二级质谱匹配峰数量分别为6,342(POS)、4,230(NEG)种，注释匹配峰数量分别为1,450(POS)、740(NEG)种；脂质分子定量强度的中位RSD为6%，表明该标准品具有很好的一致性（图2D）。
图2.脂质组标准品在三次检测中的重现性结果
（A）RPLC分离体系下正负离子模式检测得到的分子离子峰数量；（B）RPLC分离体系下正负离子模式检测得到的二级质谱匹配峰数量；（C）RPLC分离体系下正负离子模式检测得到的注释匹配峰数量；（D）定量脂质分子强度的RSD箱线图。
氨探生物生产的人血浆脂质组标准品，通过高重现性的自动化的前处理流程，并添加9种同位素重标，适用于非靶向和靶向脂质组学的分析。此外，该标准品具有很好的批次间的均匀性和重现性，满足严格的质量检测规范。期待该标准品能为脂质组学实验提供可靠的质控方法。
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2. Perspective on Emerging Mass Spectrometry Technologies for Comprehensive Lipid Structural Elucidation. Anal Chem. 2021 Apr 27;93(16):6311-6322.
3. Deep Lipidomics in Human Plasma: Cardiometabolic Disease Risk and Effect of Dietary Fat Modulation. Circulation. 2022 Jul 5;146(1):21-35.
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