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【干货】含活泼羰基化合物RP-HPLC分离的峰变形现象研究

鲲霆生物
2020.9.18

在色谱分析中,您是否有遇到过一些化合物,看其结构,既非酸也非碱,但是它们却非常“活泼”,动辄出现峰拖尾甚至分叉,让实验猿们很是捉急...

今天我们就来给大家分享下含活泼羰基化合物的峰变形现象及其解决方案,内容来自长沙晨辰医药科技有限公司技术总监刘国柱博士的分享。


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        LC-QTOF MS研究证明,含活泼羰基的化合物在酸性流动相中存在形态不单一,原形、水合半缩醛/酮、醇合半缩醛/酮共存!


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        NMR研究同样证实含活泼羰基的化合物在酸性条件下易与甲醇/水形成可逆的半缩醛/酮产物!



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        直接LC-QTOF MS分析证明,含活泼羰基的化合物在高pH值流动相中存在形态单一,都只见原形对应的MS信号,未见半缩醛/酮产物对应的MS信号!


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       NMR模拟实验同样证实,含活泼羰基化合物在高pH环境中存在形态单一,只以原形存在,未见半缩醛/酮产物对应的NMR信号!


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Q:能用高pH值的铵盐buffer解决此类峰变形的问题吗?

A:高pH值的氨水或铵盐解决不了此类峰变形问题!



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总结

1、含活泼羰基的化合物在酸性流动相中会与水/醇发生可逆的亲核加成反应,从而导致色谱峰变形!

2、提高流动相pH值,能抑制活泼羰基与水/醇发生可逆的亲核加成反应,从而有效改善峰形!

3、高pH值铵盐buffer不能解决此类峰变形的问题,因为氨自身为强亲核试剂,自身能与活泼羰基发生可逆的亲核加成反应!

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强调

本实验室也碰到过部分案例,提高pH值依然不能获得单一峰形!

羰基活性过强,高pH值条件下,依然不能抑制与水/醇的亲核加成反应!

而此时,同时提高pH值与柱柱温,能解决问题!

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Kromasil EternityXT 产品介绍

 EternityXT 系列色谱柱,是以耐碱耐酸为特点的反相色谱柱系列,适用于上述高pH条件下的分析,固定相包括C18、C8、PhenylHexyl(分别对应USP 分类L1、L7、L11),系列产品适配各型号HPLC、UHPLC仪器。


色谱柱特点

—基于有机/无机杂化技术,pH耐受范围1-12,是分析方法开发首选色谱柱;
—采用专利的端基封尾技术,有效屏蔽了硅醇基的影响,尤其适合碱性化合物的分析;
—含碳量高(C18含碳量19%),比表面积大(330m2/g),适合复杂样品分析。






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