致备将始终确保为客户提供的细胞具有真实性、正确性，无交叉污染， 客户因购买细胞而产生的质量和真假的后顾之忧，以 的诚意提供信息 的细胞产品。并提供专业的细胞鉴定服务（采用ATCC细胞鉴定金标准--STR基因分型技术），并建立完善鉴定，种类齐全的细胞资源库，能为广大科研工作者在发表高质量文章时提供可靠的“细胞鉴定依据”。

实验原理
DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基 因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。

实验流程

操作建议：收到细胞后，请用75%酒精对细胞培养瓶外表进行消毒，并将细胞置于培养箱中稳定至少1h以上，待细胞形态正常，方可进行后续操作及细胞实验。(开封前如有污染及质疑形态请及时反馈)
1.若细胞密度未超过85%，且瓶上无特殊标注，则可以收集过滤多余的培养液，视实际情况留6-8ml培养液培养过夜后处理。
2.细胞密度超过75%即可以进行传代。同样收集过滤多余的培养液，用PBS洗涤1-2次，加入1ml胰酶消化液，室温下消化，对光观察，轻拍甁壁若细胞能呈流沙状脱落，则立即用胰酶用量2倍以上的含10%血清的完全培养液终止消化，可轻轻吹打几次细胞，尽量使其变成单细胞悬液，将细胞收集于离心管中1000r离心5min即可，弃去上清，轻弹管底，将细胞弹散，加入2-3ml左右新鲜培养液重悬细胞，按所需比例进行传代。
冻存条件： 70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO(可以使用成品冻存液)
保存条件： -80℃冰箱建议不超过6个月；长期保存请使用液氮
注意事项： 1. 如收到的细胞没有相关培养经验，建议 次消化时在显微镜下实时观察消化情况，掌握细胞的 消化时间，若3分钟内无法脱落的细胞，可以在37℃条件下提高胰酶活性，适当延长时间，从加入胰酶到终止消化的过程，所有操作都要迅速；
2. 建议收到细胞后的 次传代比例为1/2 多不要超过1/3；
3. 若细胞拉丝、黏连则说明消化过度，建议适当缩短消化时间，若发现仅有一半细胞先脱落，则可以优先终止，剩下的继续消化。
售后咨询： 1.培养瓶出现破裂或漏液现象，请立即拍照并及时与我们联系；
2.开封前发现污染或质疑形态，请立即拍照并及时与我们联系；
3.发现较多细胞脱落，请先放培养箱静置1-2h再观察，若细胞能够贴回，请及时传代重铺，若不能请立即拍照并与我们联系；
4.如有任何疑问，均可与我们技术人员进行反馈。

 

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