GST pull down原理

先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育，这样互作蛋白便

一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来，即GST pulldown产

物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定出未知蛋白。

GST pull down实验流程

GST pull down应用

筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。

GST pull-down 与 Co-IP 区别：

GST pull-down 是原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果，只要互作蛋白间具有相互结合的结

构域基础即可实验证明；

Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白，并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系，分离出互作的蛋白复合物，是细胞

内的体内反应结合。

1、GST pull-down 实验优点

1）可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。

2）GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。

2、GST pull-down 实验缺点

1） 验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。

2）融合表达的 GST 标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。