一、RNAi服务介绍

研究表明，将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA（dsRNA）导入细胞，

可以使mRNA发生特异性的降解，从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制

（Post-transcriptionalgenesilencing,PTGS）被称为RNA干扰（RNAi）。由于RNAi具有高度

的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以作

为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。

我们应用国外知名公司的RNAiDesigner平台，可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序

列同源型分析，完成siRNA/miRNA多种序列的的设计，并提供从siRNA合成、RNAi载体构

建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

二、服务内容：

1、siRNA合成：

对于瞬时基因沉默实验，化学合成siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，

特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性；针对某靶基因设计的3条siRNA可保

证其中两条的Knockdown效率达到75％（染效率大于80％的情况下）。

实验流程：

1）根据序列信息，进行化学合成；

2）纯化及定量；

3）冻干处理；

4）细胞转染预实验，优化转染条件；

5）瞬时转染或稳定转染；

6）RT-PCR或Westernblot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

2、质粒载体shRNA的构建：

构建shRNA表达载体，实现shRNA在细胞中稳定表达，能够弥补瞬时转染持续时间短的不

足。

实验流程：

1）mRNA序列分析；

2）引物设计及合成；

3）单链互补引物退火；

4）将片段克隆至载体；

5）测序以确保插入序列正确性；

6）向客户提交测序结果与实验方法报告单。

3、microRNA干扰载体构建：

RNAi载体表达可以稳定地研究基因功能，载体在细胞种持续抑制靶基因的表达可达数星期

甚至更久。RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制，相比传统shRNA载体可更高效

地表达RNA发夹结构。每个基因设计的4条序列，我们保证至少有2条可以达到至少70％

转录水平的Knockdown效率（在转染效率大于80％的情况下）。

实验流程：

1）针对特定基因，设计microRNAi序列，合成该序列并退火生成双链DNA；

2）将DNA与载体连接并转化；

3）测序验证miRNA序列的正确性；

4）细胞转染预实验，优化转染条件；

5）瞬时转染或稳定转染；

6）RT-PCR或Westernblot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

4、RNAi干扰效果检测：

应用RT-PCR方法检测mRNA水平的基因敲除效果；通过Westernblot方法检测蛋白水平的

基因敲除效果。

三、服务说明

1、siRNA合成

客户提供：

1）目的基因的AccessionNumber（Human、Mouse或Rat种属）以及技术要求（包括OD和

nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等）

2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

3）一抗（如果需要Westernblot检测）

注：普通siRNA：均有HPLC纯化，100％除去尚未配对的单链；化学修饰siRNA：利用修饰

以提高siRNA在血清和培养基种的稳定性；荧光标记siRNA；siRNA对照：普通阴性对照、

荧光标记的阴性对照（易观察，可观察转染效率）和siRNA阳性对照（作为一个实验系统检

查，确保在您的实验方法是可靠的；

2、质粒载体shRNA的构建

客户提供：待研究mRNA序列信息。

3、microRNA干扰载体构建

客户提供：

1）目的基因的AccessionNumber（Human、Mouse或Rat种属）

2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

3）一抗抗体（如果需要Westernblot检测）