一、聚合酶链式反应(PCR)原理及服务
实验原理
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物, 是体外酶促合成特异DNA片段最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。
应用
1)基因的分离、克隆和核苷酸序列分析
2)突变体和重组体的构建
3)基因多态性的分析
4)遗传病和传染病的诊断
5)由少量mRNA生成 cDNA文库
6)染色体步移。
检测服务内容:
1. 基因名称及详细的样品信息;
2. 实验样本,保证样本质量;
3. 具体实验需求,如PCR产物扩增、PCR产物克隆、PCR扩增测序等。
我司提供:
1)详尽的实验报告
2)中间实验数据
*样本需求
模板:cDNA(>15μl);基因组DNA(>1μg);质粒(>100ng);PCR产物(>1μg)。
引物:包括上游和下游引物(> 0.2OD),客户可以自行提供,也可以交由我们设计合成 。
二、 实时荧光定量PCR原理及服务
实验原理
实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA双链特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法:染料法和TaqMan探针法。
实验流程:
应用
1)mRNA、micRNA、lncRNA、cirRNA的表达检测
2)SNP的基因型分析
3)基因copy数分析
4)病毒检测
5)微生物诊断
6)测序数据验证
客户提供:
1)基因名称及详细的样品信息;
2)实验样本,保证样本质量;
3)具体实验需求。
公司提供:
1)详尽实验报告及结果分析
2)中间实验数据
案例
1. 相对定量
2. 绝对定量PCR
送检与交付标准
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 |
动物组织 | 单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 |
种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 |
细胞样本 | 1. 总RNA或蛋白:10E+6 cell/指标 2. 浆/核RNA或蛋白:10E+7 cell/指标 3. 线粒体RNA或蛋白:20E+7 cell/指标 注:样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃;若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量。 | -80℃ | 干冰 |
全血/血清样本 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 |
石蜡包埋样本 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 |
抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体; 2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 |
引物 | 干粉,≥1 OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。 |