服务介绍:
原理为用ya liu酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶则不变。据此设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用甲基化的引物能得到扩增片,,则说明该位点存在甲基化。反之,说明被检测的位点不存在甲基化。若两对引物均能得到阳性PCR产物,则说明该片段部分甲基化。
甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重ya liu酸盐处理DNA后,基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物,即一对结合处理后的甲基化DNA链(引物对M),另一对结合处理后的非甲基化DNA链(引物对U)。检测MSP扩增产物,如果用引物M能扩增出片段,则说明检测位点存在甲基化;若用引物U扩增出片段,则说明被检测的位点不存在甲基化。
该方法优点是:检测灵敏度高,样品消耗少,仅需1μg的基因组DNA,可用于石蜡包埋样本;快速、简单,省时
实验流程:
取材-提取基因组DNA-ya liu酸氢盐处理-纯化DNA- PCR扩增-电泳-数据分析-发报告
送样运输要求:
动物组织:100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
细胞:1×10^6个细胞沉淀,干冰运输。
全血:最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20运输。
DNA:体积≥50 uL,浓度≥ 50 ng/ul。