RNA pull-down分子互作实验服务生物实验动物实验整体课题外包代做-参数-价格-哈尔滨中科赛恩斯生物技术有限公司手机站

产品描述

实验原理

利用体外转录标记生物素RNA探针,然后将其与蛋白提取液共孵育, 形成RNA-蛋白质复合物,此复合物被链酶亲和素标记的磁珠吸附。最后收集磁珠,分离磁珠与RNA-蛋白质复合物收集蛋白上清,用Western Blot检测目标蛋白或质谱检测。
LncRNA发挥功能的方式很广, 可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种生物学过程的调控。主要包括基因组表观遗传修饰、调控转录后翻译、发挥ceRNA、增强子RNA作用，从而对细胞的增殖、分化、迁移、凋亡、免疫发挥调控作用。
RBPs在转录后水平参与调控mRNA稳定性、LncRNA活性、应激、肿瘤发生发展、细胞凋亡等众多生物学过程，且与诸多人类疾病密切相关。RNA领域，尤其是非编码RNA研究的快速发展，催生了多种RBPs-RNAs相互作用鉴定技术。

实验流程

检索数据库找到对应的 RNA 碱基序列，再通过 RACE 扩增是否存在未知序列。确认 RNA pull down 使用的序列后，设计引物全基因合成目RNA 序列，构建到 pcDNA3.1过表达中，并测序验证序列准确性，最后提取过表达质粒备用。
sense 链即目的 RNA 序列进行实验分组，antisense 链即目的 RNA 互补序列为对照组。在正向引物前面加入 T7 启动子序列使反向引物不变。以构建过表达质粒为模板+设计合成好的引物，扩增得到体外转录模板，琼脂糖凝胶电泳检测扩增 PCR 产物情况，以纯化回收的 PCR 产物作为转录模板，用体外转录试剂盒进行转录得到目的 RNA 。
提前准备蛋白液，以上体外转录得到的 RNA ，标记生物素后纯化备用。标记生物素 RNA 探针与链霉亲和素磁珠共孵育形成复合物，生物素 RNA 探针-链霉亲和素磁珠复合物富集蛋白，富集蛋白洗脱保存。

合作流程

咨询客服，提供实验方法、内容以及相关实验要求，项目员、技术员对实验项目进行可行性评估。
出具项目报价，签订实验服务合同，双方保密协议，出具详细实验方案，客户寄送实验样本和实验试剂，
技术员根据实验方案开展预实验，网站个人中心实时更新实验进度，实验完成出具详细实验报告。

实验须知

中科赛恩斯生物坚决秉承“严肃严谨、死磕真实、拒绝造假、绝对保密”的科学服务精神，以及严格的契约精神，为您提供优质实验服务。
根据客户实验预期效果，进行一定的实验文献检索，重要步骤均使用知名品牌试剂/设备进行每一步的操作质控。
严谨的预实验设置，根据说明要求设置参照样本，用2-3种方式进行实验，为正式实验提供最佳实验条件。
使用GraphPad 软件作图，并标记显著性，提供.pzf源始文件。分析数据的原始Al文件和导出的.tif图片，提供完整的实验报告（含：实验分组、实验结果、实验结论、实验步骤）。

价格：面议

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