膜片钳实验

技术简介

膜片钳技术是用微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，以千兆欧姆以上的阻抗使之封接，使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域（膜片）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定点位，对此膜片上的离子通道的离子电流（pA级）进行监测记录的方法。用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位，向正输入端子施加指令电位时，由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的，当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时，其间的分流电流达到最小，横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流（lp）而被测量出来。

细胞膜电位检测

技术简介
  细胞膜电位包括静息电位和动作电位两种。静息电位是组织细胞安静状态下存在于膜两侧的电位差。动作电位是当细胞受刺激时，在静息电位的基础上发生的电位变化，可用荧光显微镜测定膜电位。

实验步骤
（1）将消化好的细胞移至DMEM中；
（2）加入FBS，控制浓度范围在：2-15%；
（3）加入DiBAC4(3)，控制浓度范围在：1-5 µmol/l；
（4）用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化。[Ar激光(488nm)的激光共聚焦显微镜，由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定。由于细胞膜的电位会变化，可以观察细胞质内的荧光强度变化。

线粒体膜电位检测

技术简介
   大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

实验步骤
（1）细胞培养；
（2）诱导细胞凋亡，收集细胞；
（3）稀释Incubation Buffer；
（4）配工作液；
（5）将细胞均匀悬浮并孵育；
（6）Incubation Buffer洗两次；
（7）吸取重新悬浮细胞；
（8）流式细胞仪检测，分析。

实验图片