m6A RNA甲基化-参数-价格-研载生物科技（上海）有限公司手机站

产品描述

一、什么是RNA甲基化
表观基因组指的是修饰DNA及其蛋白支架的一系列化学标记可以用来帮助解释拥有相同DNA的细胞会发育成众多的专门类型，构成不同的组织。大部分表观遗传研究都集中在与DNA以及DNA包裹的组蛋白相关的标记上。
1974年首次在mRNA中发现腺嘌呤上的一个甲基，这个被修饰的碱基被称作N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine），简写为m6A。2012年，两支团队独立发布了m6A的首个位点图谱，这些研究揭示了来自约7000个基因的mRNA上的12000多个甲基化位点。

在过去几年中，一系列重量级的文章的出现，揭示了调控这些标记所涉及的一些机制。RNA甲基化中的m6A首先在甲基化转移酶的作用下对RNA上的腺嘌呤（A）进行m6A修饰，再在去甲基化酶的作用下对已发生m6A修饰的RNA进行去甲基化修饰。最后发生m6A修饰的RNA通过被甲基化阅读蛋白识别后，行使下游的一系列功能，包括miRNA加工、mRNA出核翻译及剪切等。每个标记都需要一个“写入器（writer）”来放置，一个“擦除器（eraser）”消除，还需要“阅读器（reader）”读取。随着这些蛋白质的身份浮出水面，我们了解到m6A不仅会影响RNA剪接，还会影响翻译和RNA稳定性。

M6a基因调控途径在肿瘤里的研究目前处于起步阶段，根据文献整理，目前的研究涉及8种肿瘤以及6个M6a组成分子[1]。

比如，Li等通过基因表达芯片，发现m6A去甲基化酶FOT在特定的急性髓系白血病中表达量升高后，构建FOT的敲除的白血病细胞系，体内体外实验发现细胞生长抑制。结合m6A-seq技术，发现在白血病细胞系中，FOT的靶基因为ASB2和RARA[2]。采用类似思路，Zhang等在胶质母细胞瘤样干细胞中发现去甲基化酶ALKBH5通过促进FOXM1表达进而保证干细胞的增值及成瘤能力[3]。Su等发现代谢物R-2HG通过抑制FTO活性，进而促进白血病细胞中m6A的发生水平，以此降低了MYC/CEBPA转录物的含量而表现出抗肿瘤活性[4]。

二、m6A甲基化研究方法
（1）寻找m6A相关酶在骨关节炎中的异常表达情况。鉴于mRNA的测序和芯片数据较全，建议从数据库中寻找，比如cbioportal, oncomime和GEO datasets等。
（2）细胞及动物的表型实验。通过敲低和过表达该m6A修饰酶，检测细胞的变化，包括细胞增殖，凋亡，验证变化等指标。
（3）通过m6A-seq和RNA-seq的结合，寻找m6A含量变化和RNA分子数量变化最大的mRNA。
1、开启测序前的一些“预实验”
该步所有实验为可选项，也可以跳过这部分直接进入测序部分，来挖掘哪些基因在甲基化修饰上产生了差异。
（1）找到差异writers、erasers和readers或者检测整体m6A水平
首先，要找到与RNA甲基化相关的酶是否有差异表达。既可以是药物处理前VS药物处理后，也可以是肿瘤组织VS癌旁组织，甚至是发育的时间顺序，非模式生物不同的组织器官做比较也是考虑的研究方向。

（Ma J et al. (2017) Hepatology, 62(2): 529）
如上图所示，作者对肝癌组织、癌旁组织以及正常组织中几种常见的酶都进行了qPCR验证，发现FTO和METTL14有差异表达。
另外通过GWAS以及各种人群大队列分析得到的易感基因正好和RNA甲基化有关，那么这项课题开展下去的意义会更大。这时候RNA甲基化被赋予了新的生命，是上游课题的延续。即全基因组重测序/全外显子测序/靶向捕获测序→SNP和Indel分析→GWAS→易感基因→细胞实验/动物实验→下游通路和分子机制→最终表型。

（Li et al. (2017) Cancer Cell, 31(1):127-141）
另一种方式就是从已发表的芯片数据中，直接挖掘几种酶是否有差异表达（省钱的）。如上图Cancer Cell上的论文，前期就是从网上队列数据中筛选出FTO基因才继续进入下游的细胞实验和动物实验。
至于检测m6A整体水平，可采用LC-MS/MS或酶标仪比色法的方式进行。酶标仪相对于LC-MS/MS普及程度更高，可采用EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit的试剂盒直接进行检测，方便快捷。

（Ma J et al. (2017) Hepatology, 62(2): 529）
如上图所示，对肝癌组织、癌旁组织和正常组织在酶标仪上进行了m6A整体的水平检测后发现，肝癌组织m6A整体水平最低，而正常组织中m6A水平最高。
此外，在细胞中对几种酶进行敲低和过表达后，也可以选择使用酶标仪来检测整体的m6A水平是否发生变化。
（2）甲基化酶敲低和过表达细胞实验
这里对几种已检测的甲基化酶进行敲低或过表达，当然这一步也可以在一开始直接进行。之后观察细胞表型和动物表型，建立起相关性关系。通常细胞实验比较容易开展，可以开始进行对应敲低/过表达体系的建立。

&nbs

价格：面议

m6A RNA甲基化

产品属性

研载生物科技（上海）有限公司