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价格:
1500
透射电镜观察自噬体
产品属性
品牌
研载生物
产地
全国
型号
透射电镜观察自噬体
关注度
0
信息完整度
价格范围
1千-3千
关闭
产地:全国; 品牌:研载生物
研载生物科技(上海)有限公司
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产品描述
一、技术简介
透射电子显微镜(
Transmission Electron Microscope
,
TEM
)是使用最为广泛的一类电镜。通过发射电子束从而穿过超薄的样品,同时与样本相互作用,既而形成图像。透射电镜具有分辨率高和放大倍数高的优点。其分辨率为
0.1-0.2nm
,放大倍数为几万到几十万倍。目前透射电镜已经广泛的应用到癌症研究,病毒学研究,微生物学,细胞学研究等生物领域。
透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。电子与样品中的原子碰撞而改变方向,从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关,因此可以形成明暗不同的影像。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备超薄切片
(
通常为
50-100 nm)
。要在机体死亡后的数分钟内取材,组织块要小
(1mm3
以内
)
,常用戊2醛和锇酸双重固定,包埋介质包埋,用超薄切片机切成薄片,再经醋酸铀和柠檬酸铅等进行电子染色。
自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构,直径一般为
300
~
900nm
,平均
500nm
,普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法,是自噬检测的
“
金标准
”
。
二、实验流程
透射电镜生物样品制备步骤:
1.
固定:用
2.5%
的戊2醛固定
2
小时。
2.
锇酸固定:用
2%
的锇酸固定
2
小时。
3.
脱水:用
50%
、
70%
、
80%
、
90%
乙醇梯度脱水各
15min(70%
乙醇中过夜
)
,再用
100%
乙醇脱水
3
次,每次
20min
。
4.
置换:用bing酮置换
2
次,每次
15min
。
5.
浸渍:
a
.bing酮:包埋剂
=1
:
2
的浸渍液浸渍
4h
;
b.
纯包埋剂浸渍
2
次,每次
4h
。
6.
包埋:将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中。
7.
聚合:将包埋板置于
65℃
条件下各聚合
48h
以上。
8.
修块:将包埋头修成梯形,且样品表面积小于
0.2mm×0.2mm
。
9.
超薄切片:切片机切片
50-70 nm
。
10.
染色:
3%
醋酸铀
-
枸橼酸铅双染色。
11.
透射电镜观察,拍片。
三、服务说明及结果
1.
客户提供:细胞数需
≥10
6
。
2.
公司提供:基本实验步骤、药品、
细胞
处理、图片及图片分析。
3.
实验周期:
25-30
个工作日。
附:细胞透射电镜样本制备
1.
细胞数量:>
1*10
的
6
次方。
2.
消化细胞时要注意不要过度,及时用含血清的培养液终止消化。
3.
终止消化后,预冷的
PBS
(
pH 7.4
)洗细胞
1-2
次,离心(
1500rpm
,
5min
)弃上清(细胞最好收集在
1.5ml
的
EP
管中)。
4.
加入
1mL 2.5%
戊2醛溶液(需用
PBS
配制该溶液),可用吸管轻轻吹散细胞,使细胞悬浮于固定液中。
5.
在
4
℃固定过夜后寄出(寄送时加冰袋,并用
2.5%
戊2醛溶液将
EP
管中剩余空间充满)。
注意:药物处理特别注意不能处理过度,否则收集的细胞都是死细胞,不利于电镜观察。
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