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免疫荧光实验
产品属性
品牌
安诺伦
产地
北京
型号
免疫荧光实验
关注度
0
信息完整度
关闭
产地:北京; 品牌:安诺伦
安诺伦(北京)生物科技有限公司
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产品描述
免疫荧光实验
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique,IF)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位。
基本流程:
1. 细胞准备。对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片
2. 固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min
3. 通透。使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞,一般需要在加入抗体孵育前,对细胞进行通透处理,以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5 min
4. 封闭。使用封闭液对细胞进行封闭,时间一般为30min
5. 一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次,每次冲洗5min
6. 二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后,再用蒸馏水漂洗一次
7. 封片及检测。滴加封片剂一滴,封片,荧光显微镜检查
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