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动物细胞传代培养
产品属性
品牌
伊莱博
产地
上海
型号
动物细胞传代培养
关注度
0
信息完整度
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产地:上海; 品牌:伊莱博
伊莱博生物科技(上海)有限公司
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产品描述
贴壁细胞的传代
1
入无菌室之前首先要用肥皂或洗手液洗手,用灭溶液擦拭双手消毒。
2
打开超净工作台的紫外消毒灯(紫外消毒
20-30min
)。从
CO
2
培养箱取出培养细胞,倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置于
37
℃下预热。
3
关闭已照射超净工作台
20min
左右的紫外灯,打开抽风机清洁空气,除去臭氧。
4
点燃酒精灯,用
75%
乙醇擦拭双手消毒,并擦净台面。
5
将培养用液瓶身用
75%
酒精檫拭消毒后放入操作台内。
6
从培养箱中取出细胞培养瓶,经
75%
酒精喷洒消毒后立放于操作台内。
7
倒掉细胞旧培养液,
4ml PBS
洗涤两遍,解除残留血清对胰蛋白酶的抑制作用。
8
向培养瓶(
25cm
2
)加入
1ml
的胰酶消化液,小瓶用量酬减。
9
盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察,立刻放入培养箱中消化,一般
1-2min
。
10
当细胞突起收回即将变圆时立即取出。
11
加入
5ml
含血清的新鲜培养基,反复吹打贴壁细胞的培养瓶底部使消化好的细胞脱壁并分散,移入
10ml
离心管中,
800 r/min
,
2min
。
12
加入
1-2ml
培养基制成细胞悬液并计数。根据计数结果,按每个小方瓶
2
×
10
5
接种细胞传代培养。
13
盖上瓶盖,适度柠紧后再稍旋回,给出空气通道,以利于
CO
2
气体的进出,将培养瓶放回培养箱。
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