兽医学标准-分析测试百科网

T/CVDA 4-2022 动物中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体检测技术

本技术标准适用于中东呼吸综合征病毒动物血清中和抗体检测，目的：常规的中东呼吸综合征病毒中和抗体检测需在生物安全3级实验室进行，不便于一般单位开展。本项目拟以一种更安全的重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS代替全病毒进行病毒中和抗体检测。本项目拟规定动物中东呼吸综合征病毒中和抗体检测技术的技术要求，建立动物中东呼吸综合征病毒中和抗体检测技术的诊断标准。意义：本项目检测技术大大降低了生物安全风险与要求，在常规生物安全2级实验室即可检测。提高了对动物中东呼吸综合征病毒中和抗体的检测能力，以便更好把握该病流行趋势，为制定有效防控措施提供参考，同时可为评价动物中东呼吸综合征疫苗免疫效果提供依据。本技术标准适用于中东呼吸综合征病毒动物血清中和抗体检测，通过血清中东呼吸综合征病毒中和抗体检测，辅助判断动物感染中东呼吸综合征病毒情况或评价动物中东呼吸综合征疫苗免疫效果。主要技术内容为： 1、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS质粒构建； 2、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS拯救； 3、重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS鉴定与毒价测定； 4、动物血清的采集与灭活； 5、血清与重组病毒VSVΔG-eGFP-MERS的中和与细胞接种； 6、通过荧光灶观察与判定结果。

Detecting technique of neutralization antibody against MERS-CoV in animals

ICS: 11.220
CCS: A053
发布: 2022-07-19
实施: 2022-07-25

T/CVDA 3-2022 动物埃博拉病毒中和抗体检测技术

埃博拉出血热（Ebola hemorrhagic fever，EHF）是由埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）感染引起的急性，发热并伴有严重出血症状的烈性人兽共患病。EBOV是致死率最高的病原之一，感染后致死率最高可达90%。自1976年EHF在扎伊尔东北部和苏丹南部暴发以来，至今发生过多次疫情。研制能够快速鉴定病毒感染的血清学方法，以采取针对性治疗措施、预防病毒扩散，非常重要。本标准利用水泡性口炎病毒（VSV）的反向遗传操作系统，以EBOV的糖蛋白基因GP替换VSV基因组的糖蛋白基因G，同时表达增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP），构建成表达EGFP的嵌合型重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP。EBOV的GP蛋白是诱导中和抗体产生的唯一结构蛋白，此重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP表达EBOV的GP蛋白，可以与含有EBOV中和抗体的血清特异性结合并被血清中和，阻断病毒感染。目前检测EBOV中和抗体的方法主要是通过EBOV活毒在生物安全四级实验室进行，受试验条件限制且生物安全风险高。以VSVΔG-EBOVGP-EGFP代替EBOV活毒进行EBOV中和抗体检测可以在BSL-2实验室进行操作。本标准以人或动物血清为检测对象，以EBOV的糖蛋白基因GP替换VSV基因组的糖蛋白基因G拯救得到的嵌合型重组病毒VSVΔG-EBOVGP-EGFP为检测抗原，可以与含有EBOV中和抗体的血清特异性结合并被血清中和，阻断病毒感染。该检测技术可以对疑似感染EBOV的人或动物血清、或经EBOV疫苗免疫的人或动物血清的中和抗体水平在BSL-2实验室进行评价。

Detecting technique of neutralization antibody against Ebola virus in animals

ICS: 11.220
CCS: A053
发布: 2022-07-19
实施: 2022-07-25

T/CVDA 1-2022 动物西尼罗病毒中和抗体检测技术

本技术标准适用于西尼罗病毒易感动物血清中和抗体检测，通过血清西尼罗病毒中和抗体检测，辅助判断动物感染西尼罗病毒情况或动物西尼罗热疫苗免疫效果。主要技术内容为： 1、稳定表达西尼罗病毒C-prM-E蛋白细胞系的构建； 2、缺失细胞蛋白基因、表达绿色荧光蛋白的西尼罗病毒复制子的构建； 3、西尼罗病毒复制子病毒的包装与滴定； 4、动物血清的采集与灭活； 5、血清与西尼罗病毒复制子病毒的中和与细胞接种； 6、通过荧光灶观察与判定结果； 7、通过病毒噬斑计数观察与判定结果。

Detecting technique of neutralization antibody against West Nile virus in animals