清洁级SD大鼠，雌性，3-4周，若干。
主要试剂配制
（1）EBM-2Kit培养基：按说明书加入生长因子和血清（2%FBS）。
（2）PBS磷酸盐缓冲液： PBS粉剂用ddH2O定容至1000 mL，调pH7.2，121℃、30min高压灭菌，4℃保存备用。
细胞操作实验方法
（1）取SD大鼠，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。
（3）去除骨骺端，用1mL无菌注射器吸取DMEM溶液冲洗骨髓直至骨髓腔变白，吸入离心管内，1000rpm离心5min，弃上清。用PBS重悬细胞沉淀。
（4）缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。
（5）2000rpm离心20min，离心后溶液分5层，吸取中间骨髓基质细胞层（白膜层），PBS洗3次。
（6）用含生长因子和血清（2%FBS）的EBM-2培养基以106/mL细胞浓度接种于6孔板中，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养，48h后取出未贴壁细胞继续培养。
四、无菌操作注意事项
细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。
五、服务流程：