CRISPRa的原理       催化失活的Cas9（dCas9）连上转录激活子，可以有效促进基因组特定位点的转录，这一工具被称为CRISPRa。CRISPRa特别适合分析非编码RNA的具体功能。
 CRISPRa载体介绍       pXD9a和pXD9a-helper是第三代慢病毒载体。pXD9a表达具有两个SM2茎环结构的sgRNA和dCas9-VP64，pXD9a-helper表达MS2-P65-HSF1。VP64、P65和HSF1是强转录激活域。MS2能够与SM2茎环结构特异性结合。由具有SM2茎环结构的sgRNA、dCas9-VP64和MS2-P65-HSF1组成的复合体结合到基因组DNA中的靶位点上，激活下游基因大量转录。
       pXD9a可以单独使用，但是与pXD9a-helper共转染细胞能获得更强的激活效果。
 



 CRISPRa质粒构建流程

 

 

CRISPRa质粒构建服务说明
 

1、客户提供基因名称和基因编号。
2、HYY提供：
       （1）CRISPRa质粒（20μg pXD9a质粒和20μg pXD9a-helper质粒），浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上；
       （2）CRISPRa质粒的菌液各500μL；
       （3）CRISPRa质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列；
       （4）CRISPRa质粒的构建报告。
3、实验周期2～3周。