RNAi抑制基因表达的原理
 

       Dicer酶将dsRNA切割成19-21bp的双链RNA(siRNA)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)。ATP依赖的siRNA解双链激活RISC，激活的RISC通过碱基配对定位到靶标RNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割靶标RNA，致使靶标基因的表达量降低。
RNAi抑制载体一般表达shRNA，Dicer酶将shRNA切割成siRNA。
 

抑制表达载体介绍

       pLV.I：具有copGFP（GFP的一种变体）荧光标记基因和Puro抗性基因。



        pLV.I2：具有copGFP荧光标记基因和BSD抗性基因。

 

pLV.I3：具有mCherry（RFP的一种变体）荧光标记基因和Puro抗性基因。



pLV.I4：具有mCherry荧光标记基因和BSD抗性基因。


         以上抑制表达载体均是第三代慢病毒载体，可用于构建稳定细胞株，具有荧光标记基因和抗性基因，H1启动子驱动shRNA大量表达，进而抑制目的蛋白编码基因、LncRNA和miRNA表达。荧光标记基因便于检测抑制表达载体的转化效率、慢病毒滴度和慢病毒的转染效率。抑制表达质粒构建流程

抑制表达质粒构建服务说明

1、客户提供基因名称和基因编号。
2、HYY提供：
       （1）20μg抑制表达质粒，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上；
       （2）500μL抑制表达质粒的菌液；
       （3）抑制表达质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列；
       （4）抑制表达质粒构建报告。
3、实验周期1～2周。