全基因敲除库的用途      
       CRISPR/Cas9作为当今基因编辑领域最热门的明星工具，自2014年以来，多篇CNS(Cell、Nature、Science)连续报道了基于CRISPR/Cas9的高通量筛选技术。本公司的基于CRISPR/Cas9的全基因敲除库（人）可以用于药物靶标发现，药物敏感基因、耐药性相关基因、肿瘤细胞增殖关键基因、肿瘤转移相关基因、放疗耐受相关基因、细胞对致死致病原感染敏感关键基因的高通量功能性筛选等。
全基因敲除库（人）介绍

 

       全基因敲除库（人，gRNA pooled library in lentiCRISPRv2）购自Addgene（1000000048），是Human CRISPR Knockout Pooled Library (GeCKO v2)的一种，由张锋的团队构建（Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014）。

       全基因敲除库（人）为慢病毒载体文库，载体骨架是lentiCRISPR v2（Addgene，52961）。lentiCRISPRv2能够表达sgRNA、Cas9和Puro抗性基因。慢病毒载体形式的文库能够提高感染与敲除效率，而且同时表达sgRNA和Cas9的单一载体能够应用于任何感兴趣的细胞类型，而不需要首先产生表达Cas9的细胞系。全基因敲除库（人）具有123411个sgRNA结构，靶向人类基因组中19050个编码基因及1864个miRNA。

 

 

gRNA pooled library in lentiCRISPRv2

Species

human

Number of coding genes targeted

19,050

Targeting constructs per coding gene

6 per gene (3 in Library A, 3 in Library B)

Number of miRNA targeted

1,864

Targeting constructs per miRNA

4 per miRNA

Control (non targeting) sgRNAs

1,000

Total sgRNA constructs

  

123,411 (65,383 in Library A, 58,028 in Library B)

  
  

Viral plasmid vector

   

Single lentiCRISPR v2

  

 

 

 全基因敲除库（人）的使用方法

1、全基因敲除库（人）慢病毒包装。
2、慢病毒粒感染目标细胞，Puro筛选阳性细胞。
3、药物筛选或者辐射处理等，对照组不处理或者虚假处理。
4、提取基因组DNA，PCR扩增sgRNA的编码序列。
5、sgRNA的编码序列高通量测序。
6、比较对照组和实验组的高通量测序结果，筛选感兴趣的基因。
7、单独验证筛选出来的基因。
 

使用CRISPR/Cas9全基因敲除库的文献

 

1、Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. Science, 2014
2、Genetic screens in human cells using the CRISPR-Cas9 system. Science, 2014
3、High-throughput screening of a CRISPR/Cas9 library for functional genomics in human cells. Nature, 2014
4、A genome-wide CRISPR screen in primary immune cells to dissect regulatory networks. Cell, 2015
5、Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis. Cell, 2015
6、High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities. Cell, 2015
7、Identification and characterization of essential genes in the human genome. Science, 2015
8、Discovery of cancer drug targets by CRISPR-Cas9 screening of protein domains. Nature biotechnology, 2015
9、Functional genetic screens for enhancer elements in the human genome using CRISPR-Cas9. Nature biotechnology, 2016
10、Genome-scale CRISPR-Cas9 Knockout and Transcriptional Activation Screening. Nature Protocols, 2017
11、CRISPR/Cas9 screening using unique molecular identifiers. Molecular Systems Biology, 2017
 

全基因敲除库（人）出货说明

 

1、全基因敲除库（人）20μg，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2、全基因敲除库（人）说明书一份。
3、服务周期：1-2周。