SDS-PAGE-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,是常用的蛋白表达分析技术,是对蛋白质进行量化、比较以及特性鉴定的一种经济、快速、可重复的方法可以用于鉴定蛋白的表达情况(表达量和表达分布)以及分析目的蛋白的纯度等。
技术原理
SDS-PAGE主要利用聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应分离蛋白质,测定分子量的大小。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶
在凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),有变性剂与助溶剂的作用,和蛋白的疏水部分结合,破坏其折叠结构,从而让多肽变性,使蛋白质带负电,削弱了蛋白质电泳时电荷和分子量大小的因素。当分子在15-200KD时,蛋白质的迁移率和分子量的对数称线性关系。分子量越小,迁移速率越快。
应用范围
蛋白质纯度分析、分子量测定、浓度测定、免疫沉淀蛋白鉴定、蛋白质修饰鉴定、分离和浓缩用产生抗体的抗原、分离放射性标记的蛋白质。