这样的多色荧光标记图谱，你可能没见过...

本文主要目的：带小伙伴们赏析通过滨松S60数字病理切片扫描仪扫描出来的多色荧光标记图谱，话不多说，直接上案例展示。

案例一小鼠胚胎石蜡切片

NEON霓虹6色标记染色，组织面积：7.12mmX11.9mm，20倍全景模式，切片扫描时间18分44秒（含聚焦时间）。

为了让大家可以看得更清楚，下面是小鼠胚胎心脏和肺部放大展示。

案例二小鼠骨骼冰冻切片

NEON霓虹5色标记染色，组织面积：7.12mmX13.1mm，20倍全景模式，切片扫描时间16分23秒（含聚焦时间）。

开头所展示的多色荧光标记图谱，便是采用了滨松科研型NanoZoomer S60进行扫描，配合霓虹的DendronFluor®多色荧光标记染料，使得整个多色研究轻而易举。

通过精妙的滤色片设计及组合，配合DendronFluor®TSA的超多色荧光种类，我们最终确认了不依赖光谱拆分的6色方案，信号层次感和精确度进一步提升，并革命性地将扫描和分析速度提高一个数量级。

稳定

滨松NanoZoomer S60具有光路的自动校准功能，会智能化地检测光路状态并自动进行光路校正；与机械部分的高精度激光传感器一起保证了长时间流畅的自动工作以及成像质量的稳定。此外，黑色的箱式设计对外界的干扰起到了极好的屏蔽，无需避光就能以最佳状态完成荧光样品扫描。

灵活

科研中的样品往往多种多样——荧光、明场、标准切片、双倍标准尺寸的大型切片，为了做到真正方便易用的用户体验，S60可以将不同要求、大小的切片随意插入样品槽，实现多种模式的自动扫描。

高速&高通量

S60具有3个独立的切片进样槽，每个进样槽中可以放20张标准切片或者10张双倍标准尺寸的大型样本切片，最高可实现一键60片的高通量自动扫描。

S60采用滨松旗舰级高速高灵敏度相机Flash 4.0系列保证了对较弱荧光信号的高速扫描。

TSA荧光标记技术

肿瘤微环境，即肿瘤细胞产生和生活的内环境，其中不仅包括了肿瘤细胞本身，还有其周围的成纤维细胞、免疫和炎性细胞、胶质细胞等各种细胞，同时也包括附近区域内的生物分子等。肿瘤微环境可以深刻的影响疾病的特征和对患者的治疗，这一因素在免疫疗法中的反映尤为明显，因为肿瘤微环境中免疫细胞的组成常常会决定其对某种特定疗法的响应，从而决定了癌症免疫疗法的成败。

传统的免疫荧光技术一般只能标记3种靶点，一抗种类需要不同种属的不同抗体，并且连接荧光探针的二抗也需要属于不同的种属。从染色效果以及染色方法来看，为了确保抗本抗原的位置差异需要设计非常复杂的染色方案，而且染色效果比较容易淬灭。

为了更好地对复杂的肿瘤微环境进行描述，组织多色免疫荧光标记技术应运而生。组织多色免疫荧光 (mIHC) 是一套基于酪酰胺信号放大技术 (TSA，TyramideSignal Amplification) 的多标记免疫组化染色方案。利⽤基于IHC免疫组化的“⼀抗➛HRP⼆抗➛底物” 原理及步骤，TSA荧光化合物在HRP催化下与靶点附近的酪氨酸残基结合，⽣成稳定荧光化合物。

与传统的免疫荧光相比，TSA技术：

1、可将信号放大10-1000倍；

2、荧光化合物具有理想的光、热、pH稳定性；

3、多色荧光标记不受一抗种属限制。

升级版TSA荧光标记技术

DendronFluor®TSA是新⼀代多⾊荧光信号放⼤技术，与传统TSA信号放⼤相⽐，DendronFluor®TSA通过Dendrimier枝杈分⼦连接更多荧光分⼦，在成倍提⾼荧光信号的同时减少多轮标记的占位效应。

升级版TSA在原有技术优势上，更多了如下优势:

1、成倍提升荧光信号；

2、减少多轮标记的占位效应；

3、节省更多抗体；

4、超多色荧光可选。