使用Oasis PRiME MCX开发简便、快速的SPE方案用于 萃取碱性分析物并有效去除磷脂

应用领域:蛋白/抗体/蛋白质组

检测样品:碱性分析物

检测项目:萃取,去除磷脂

方案摘要

液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术是生物样品的定量分析中应用最广 泛的技术之一。生物样品中的内源性磷脂增加了分析难度,磷脂可引起显著 的基质效应1 ,使得分析物MS信号受到抑制或增强。如果目标峰与磷脂洗脱 的区域重叠,会导致分析物峰面积变化,进而使得最终报告的分析物浓度发 生变化。磷脂还可能牢牢附着到色谱柱上2 ,它们在色谱柱上的积聚可能会改 变分析物的选择性和保留性。最终,色谱柱中的磷脂达到饱和,过量的磷脂 将逐渐流出色谱柱,这样无论分析物何时洗脱流出都会受到影响,从而引发 基质效应。分析人员为了缩短LC-MS/MS运行时间并最大限度提高灵敏度, 往往会选择较短的窄径色谱柱,而这种色谱柱最易出现上述问题。此外,如 果磷脂在接口处积聚,还可能污染LC-MS系统。 

为了解决这些问题,人们已经开发出多种样品制备方法。使用乙腈等溶剂进 行蛋白沉淀是常用的方法之一,但该方法无法有效去除磷脂3 。固相萃取(SPE) 技术比蛋白沉淀法更有效,但其去除磷脂的效果不尽相同2,3,4。分析碱性化合 物时,混合模式反相/强阳离子交换(RP/SCX) SPE吸附剂能够选择性地保留 并浓缩这类分析物。选择合适的上样和清洗条件是成功去除磷脂,同时保持 分析物较高回收率的关键。在本应用纪要中,我们使用Oasis PRiME MCX开 发了一套简便、快速的SPE制备方案。Oasis PRiME MCX以Oasis MCX技术 为基础,是沃特世推出的全新混合模式RP/SCX样品制备系列产品。

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