抗叶酸制剂甲氨蝶呤是一种被广泛用于治疗各种恶性肿瘤的药物。过去，人们 使用基于酶和荧光的免疫分析法来测定甲氨蝶呤浓度，但是研究表明它们会与 非活性代谢物2,4-二氨基-N10-甲基蝶酸(DAMPA)发生交叉反应。对于CNS淋巴 瘤患者1 ，标示外使用大剂量甲氨蝶呤(> 500 mg/m2 )的同时通常都会配合施用 羧肽酶(Voraxaze)，或采用甲酰四氢叶酸解救疗法，目的是将甲氨蝶呤的浓度 降至1 mmol/L以下。由于DAMPA浓度升高，免疫分析技术可能会高估羧肽酶 给药后的甲氨蝶呤浓度，因此在进行高剂量甲氨蝶呤的临床试验时，使用高选 择性的检测方法非常重要。 

本文介绍了一种临床研究方法，其使用溶于甲醇的甲氨蝶呤-2 H3 内标对血浆或 血清样品进行去蛋白处理。该方法使用ACQUITY UPLC HSS C18 SB色谱柱(2.1 x 30 mm, 1.8 µm)和ACQUITY UPLC I-Class系统，在5分钟之内即可完成等度 分离，然后在Xevo TQD质谱仪上进行检测。