最近功能和分析蛋白质表征测定的进展增加了对分析所需蛋白质的需求。因此，现在有许多不同的技术可用于通过亲和色谱法扩大蛋白质分离的通量，这已成为早期药物发现的主要方法。然而，很少有纯化平台针对小规模纯化进行优化，导致非浓缩蛋白质样品与许多下游分析技术和测定不兼容。此外，当目标是简化工作流程时，任何缺乏编程和自动化专业知识的情况都可能导致在设置这些流程时花费的时间比节省的时间还要多。

因此，我们评估了Opentrons OT-2液体处理机器人在小规模亲和纯化方面的性能，使用镍-NTA磁珠从小体积细胞裂解物中纯化带有6x组氨酸标签的重组蛋白。我们展示了OT-2如何自动化一个完整的纯化过程，包括样品和缓冲液的准备、与磁珠的结合和洗涤、以及最终的洗脱和收集步骤。我们还展示了如何使用OT-2的API编程接口定制和优化协议，以适应不同的样品体积、磁珠类型和纯化条件。

我们的结果表明，OT-2可以可靠地执行小规模的亲和纯化，产生高质量的蛋白质样品，可用于后续的生化和生物物理分析。我们还发现，通过API编程可以灵活地调整协议参数，以适应不同的实验需求和优化条件。总的来说，OT-2提供了一个用户友好的平台，可以简化和加速小规模的蛋白质纯化工作流程，同时保持高质量的结果和灵活性。

PhyTip柱是一种基于尖端的色谱柱，通过流动相（例如样品溶液）在固定相（即填装在尖端的树脂）上的双向流动，将目标生物分子与非目标分子分离，这个过程称为双向流色谱。基本的色谱学原理控制着分离过程，而双向流动驱使相互作用达到高结合平衡，而不受动力学速率常数的影响。纯化后的样品可以在小体积内洗脱，从而获得高度浓缩的样品。双向流色谱是一种温和的纯化过程，可产生高水平的生物活性蛋白质。

使用蛋白质A的一系列PhyTip柱可用于纯化或富集抗体。蛋白质A是一种49 kDa的细菌表面蛋白，与大多数IgG的Fc区域具有高亲和力。ProPlus（MabSelect™ SuRe™，Cytiva）和ProPlus LX（MabSelect SuRe，Cytiva）尖端使用经过工程改造的蛋白质A，增加了与目标IgG的结合容量。

另外一种常见的纯化或富集蛋白质的方法是固相金属亲和色谱（IMAC）。这种方法利用金属离子提取带有基因工程标签的重组蛋白质，通常是一种可以螯合金属离子的肽。使用镍离子（Ni）的PhyTip与IMAC亲和树脂是一种有效的工具，通过Ni2+和His残基的强亲和力来纯化多组氨酸（His）标签的蛋白质。

OT-2提供了一个易于使用的自动化平台，适合普通生物学家使用。PhyTip柱装在适用于OT-2的单通道和8通道移液管尖端中，因此可以在OT-2上实现纯化过程的完全自动化。在这里，评估了PhyTip柱在OT-2上的性能，并展示了将多种应用适应此平台的能力。