iTRAQ/TMT定量蛋白组...
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TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组学分析

iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用多个(2-10)稳定同位素标签,特异性标记多肽的氨基基团进行串联质谱分析,能够同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量,可用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。

对于可以传代的细胞样品来说,我们可以采取SILAC的方法完成对于细胞蛋白质组的标记过程,但是许多其他研究体系,比如组织样品以及不能进行传代培养的细胞来说,需要其他的标记方法来完成定量蛋白组学分析。iTRAQ等基于体外(in vitro)标记的定量方法应运而生。

iTRAQ标签包括三部分,如下图:

1. 报告基团(reporter group):指示蛋白样品丰度水平。
2. 平衡基团(balance group):平衡报告基团的质量差,使等重标签重量一致,保证标记的同一肽段m/z相同。
3. 肽反应基团(amine-specific reactive group):能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而标记上肽段。

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