BTP-泛素化定量蛋白组学研究

泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰。泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物体内80%~85%的蛋白质降解。此外，泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位，调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA 损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。

百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，推出泛素化定量蛋白组分析服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的样品寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、泛素化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

由于翻译后修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广，质谱分析前需要对修饰进行富集以提高其丰度，然后利用传统的定量蛋白组分析手段对富集得到的泛素化肽段样品进行定量分析。百泰派克公司基于发表在Nature Protocol上的文章：Large-scale identification of ubiquitination sites by mass spectrometry建立了该分析服务的实验平台，采用完全复制的方式；首先对泛素化的蛋白进行胰酶消化，在赖氨酸的修饰位点上会产生两个甘氨酸的残基(K-GG)，利用CST公司提供的针对该残基的试剂盒对泛素化肽段进行特异性的富集。我们使用HPLC对样品进行预分离，再使用抗特殊残基结构的抗体进行泛素化肽段的富集，极大地提高了泛素化蛋白的鉴定量。同时，在Nature Protocl文章基础上，为了鉴定和定量更多的乙酰化肽段，我们在酶切过程中会使用2-3中不同的酶对蛋白样品进行酶切，保证带有乙酰化位点的肽段以高离子化效率的方式进入质谱进行分析，排除因为肽段长度不合适、离子化效率低造成的乙酰化信息的丢失。