染色体步移(chromosome walking) - 实验方法详情页

在克隆基因组基因时，已知该基因在染色体上的位置但没有该基因的序列信息，无法制备相应的探针，因此无法直接筛查文库去克隆基因。此时，如果知道离开该基因一定距离上的 DNA 序列，则可用这个 DNA 序列作探针，通过染色体步移来逐步接近并最后达到待克隆的基因。其基本原理是用探针筛查文库，得到阳性克隆后，将这个重组载体中的插入片段分离出来，然后用这个片段的末端部分 ( 注意不能包含重复序列 ) 作为新一轮筛查文库的探针；得到新的重组载体中的插入片段，同上一个插入片段的末端部分 ( 即探针序列 ) 是重叠的，共有的。也就是这两个片段是在同一条染色体上相互邻接的。’于是，再用新得的插入片段的末端部分作为探针，再去筛查文库。通过一系列的操作，得到的插入片段逐渐连接延伸，最后可以步移到待克隆的基因。当然，在具体操作过程中还必须设计具体的方法，如同时构建跳步文库 (jumping library) 和连接文库 (1inking library) 等，使插入片段朝着一个方向步移。