Classic PEP在硝基呋喃类代谢物残留量测定中的应用

1. 材料：SPE柱：Classic PEP(60mg/3mL)

2. 样品制备

（1）奶粉和牛奶样品处理

1）样品处理：奶粉1g(牛奶称5g)，加15 mL三氯乙酸-水混合溶液（2+1，5mol）,加内标，加混标，37.5℃水浴水解5小时，取出后4000 rpm离心5min，取上清液待用。

2）样品初步净化及衍生：Classic PEP柱以5mL甲醇，5mL水活化，后把2.1.B处理好的上清液过柱，待样液全部通过固相萃取柱后用5mL的三氯乙酸淋洗全部收集到另一个管中，加100μL衍生剂(20mg 2-硝基苯甲醛溶于1ml二甲亚砜)，放入37.5℃水浴中衍生16小时（过夜）。

（2） 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品和蜂蜜样品处理

1）样品粗处理：猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品称2g（蜂蜜称5g），加入15mL甲醇-水混合溶液（2+1），涡旋，混匀， 4000 rpm离心5min，吸取上清液，加入内标及混标。

2）衍生：在上述上清液中加100μL衍生剂(20mg 2-硝基苯甲醛溶于1mL二甲亚砜)，放入37.5℃水浴中衍生16小时（过夜）。加磷酸氢二钾缓冲液5mL（pH约为7.4），4000 rpm离心10 min，（若待测样品含脂肪较多，上清液加5mL正己烷，振荡2 min，4000 rpm离心10 min吸取并弃掉正己烷）

3. Classic PEP柱 净化

（1）活化：Classic PEP柱以5mL甲醇，5mL水活化

（2）上样：将2.2B或2.2B中的衍生液加磷酸氢二钾缓冲液5mL，用1mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH约为7.4，4000r/min离心10min，上清液（若待测样品含脂肪较多，上清液加5mL正己烷，振荡2min，4000r/min离心10min吸取并弃掉正己烷）

以小于2mL/min的流速通过Classic PEP柱。

（3）淋洗：以10mL水洗涤固相萃取柱，弃去全部流出液。用真空泵在65 KPa负压下抽干Classic PEP固相萃取柱15min。

（4）洗脱：用5mL乙酸乙酯洗脱被测物于25mL棕色离心管中。

（5）浓缩：洗脱液在40℃水浴中氮气吹干，用样品定容液溶解并定容至1.0mL，混匀后过0.2μm滤膜用液相色谱-串联质谱测定。