分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

毛细管电泳各类物质的分离要点

2018.4.02
头像

Sabrina_刘

致力于为分析测试行业奉献终身

1.阴离子及有机酸:
?此类物质没有紫外吸收,要采用间接检测法
?间接紫外法一般以铬酸钠等物质作为背景吸收物
?CTAB通常用作电渗流反向剂,以加速出峰,提高峰的尖锐度
?要使用反向极性分离

2.阳离子及金属离子的分离:
?此类物质没有紫外吸收,要采用间接检测法
?间接紫外法一般以氨基吡啶等物质作为背景吸收物
?与阴离子不同的是阳离子的分析不需要在缓冲溶液中添加电渗流反向试剂
?也不需要使用反向极性分离

3.易电离有极性的化合物:
?一般采用长60cm的毛细管
?分离的最佳pH在分析物pKa正负1左右
?通常不需要添加剂

4.弱极性物质和水溶性差的物质(一些中药成分、农药等):
?要注意分析物的溶解性,防止在毛细管中的沉淀
?通过有机溶剂的添加,提高分析物在buffer中的溶解度
?添加SDS,增加溶解度
?降低样品中分析物的浓度,延长ramp time也可以防止分析物的析出

5.还原性的单糖、寡糖和多糖(葡萄糖、半乳糖等及其聚合物):
?通常无紫外和荧光,注意检测问题
?可用APTS等衍生试剂衍生,使其带上电荷和紫外/荧光基团
?多糖也可以采用末端吸收来检测(180-200nm),不需要衍生化处理,但是要尽量采用高pH使得羟基部分电离带电

6.非还原性的单糖、寡糖和多糖:
?很难采用衍生的方法检测,通常对单糖和寡糖采用间接检测法
?对多糖采用末端吸收的方法来检测
?通常采用高pH使得羟基部分电离带电
?高pH缓冲液还有防止多糖在毛细管内壁吸附的作用

7.单链核苷酸、双链核苷酸片断及PCR产物:
?容易在毛细管内壁吸附,通常需要使用涂层管或者对毛细管进行动态涂层
?分子筛原理,凝胶的种类和浓度决定了分辨率的最佳范围和大小

8.多肽及蛋白质:
?一般来说小的肽段不需要考虑在毛细管内壁的吸附问题
?对于大的肽段和蛋白质一定要考虑在毛细管内壁的吸附,可采用极端pH和涂层毛细管的方法来避免吸附
?在使用极端pH条件的时候,通常都是用正向电压分离
?在使用涂层毛细管时通常没有电渗流,而蛋白是两性物质,需要仔细考虑使用涂层管时的分离极性

互联网
仪器推荐
文章推荐