BHA测定（比色法）抗氧化剂

一. BHA测定（比色法）

1.原理  用石油醚将样品中的BHA提取出来，根据BHA在石油醚和含水乙醇项中分配系数不同，使其溶解72%的乙醇中，BHA与2，6-二氯醌氯亚胺的硼砂溶液生成一系列兰色反应，可比色测定620nm.

2.操作方法

 (1)绘标准曲线   编号   1     2     3     4       5       6

 BHA标液10μg/ml    0.    0.1   0.3   0.5    0.7    0.9

72%乙醇      ————→分别稀释12ml←———————

0.01%2，6---二氯醌氯亚胺  2     2     2     2     2     2

硼砂溶液2%                         2     2     2     2     2     2

静止15分钟

比色620nm       绘制标准曲线

(2)样品分析

称鱼肉2g→于50ml量筒→加无水乙醇2 ml→石油醚（30-60℃ ） 48ml→摇匀→静止24小时→吸上溶液25ml→于125ml分液漏斗中→用72%乙醇分四次提取→合并于50ml容量瓶→加72%乙醇于刻度，若浑浊过滤→取2ml于比色管中→加72%乙醇12ml→加2，6---二氯醌氯亚胺2ml→硼砂溶液2ml→静止15分钟→620nm比色

(3)计算 BHA(μg/kg)=V*V₁*C/W*V₂*V₃

V--------样品定容总体积(ml)

V_{1------------}将提取液定容(ml)

C---------相当于标液浓度

W--------样品的重量（g）

V₂--------取样品总体积(ml)

V_3-----------测定时所用提取液的总体积

BHA(mg/kg)=C/W *100                            

C-------相当于BHA的标准量(mg)

W------相当于样品溶液的重量(g)

注意事项：

染料2，6---二氯醌氯亚胺溶液见光后易变质，储于棕色瓶中超过6小时经重新配制在冰箱中可保存3天，一般为用时配制。

例：腌鱼肉2克定容50 ml取出25ml提取BHA定容50ml,测定时取2ml, 取溶液（相当于5微克）代入上式计算

BHA(mg/kg)=V/W * V_1-/ V₂ C/ V₃=50ml/2g *50ml/25ml *5μg/2ml=125(mg/kg)