实验步骤
1. 取50ml 细胞悬浮液与50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等体积混合均匀于1.5ml 小离心管中。
2. 取少许混合液(约15ml) 自血球计数盘chamber 上方凹槽加入,盖上盖玻片,于100 倍倒立显微镜下观察,活细胞不染色,死细胞则为蓝色(或红色- Erythrosin bluish)。
3. 计数四个大方格之细胞总数,再除4,乘以稀释倍数(至少乘以2,因与trypan blue等体积混合),zui后乘104 ,即为每ml 中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上,只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。
4. 大格*细胞总数x 2 x 104 / 4= 细胞数/ml*每一大格的体积= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml
5. 若不用血球计数盘,可用Coulter counter 作自动计数,惟无法辨别死细胞或活细胞。
6. 范例:T75 monolayer culture 制成10ml 细胞悬浮液,取0.1 ml 溶液与0.1ml trypan blue 混合均匀于试管中,取少许混合液加入血球计数盘,计数四大方格内之细胞数目。