!要避免RNase 污染
1需使用DEPC或高温高压处理耗材、器皿、试剂
2要求控制标本量:如组织:约40~100mg/ml TRIzol;
细胞:106~107细胞/ml TRIzol
3严格按照RNA抽提步骤进行,如戴手套、口罩操作实验
4如检测miRNA,必须含小分子RNA
1、RNA检测---采用甲醛变性胶
理论上28S:18S = 2.7:1 即为高质量的RNA
2、分光光度法检测
3、1.7 <A260 /A280 < 2.0------------基本无污染
A260 /A280 <1.6------------蛋白或有机相污染
解决:
a.确保不要吸入中间层及有机相
b.减少起始样品量,确保裂解完全
c. 加氯仿重新再抽提、纯化
4、A260 /A230 比值低-------试剂残留(乙醇)、多糖类污染
解决:
a. 加氯仿重新再抽提、纯化
b. 风干RNA沉淀前去尽乙醇