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聚合酶链反应PCR反应体系

2019.3.02
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

PCR是20世纪80年代由美国西特斯公司的一批科学家、技术人员和商人发明的,主要发明者凯利·穆利斯(Kary Mullis)因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。其他科学家和技术人员,包括厄立克(Henry Erlieh)、安海姆(Norman Arnheim)、才木(Ran—daliSaiki)、霍恩(GlenHorn)、利文生(Corey Levenson),沙夫(StevenScharf)等都在造就PCR的理论和实践过程中起关键作用。

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)PCR技术有助于鉴定某一特定的片段,它能在短时间内精确地复制成百万的该DNA片段,使一度非常稀有的实验所需要的遗传物质变得丰富。遗传物质不但总量变多,而且不再受限于活的生物体。该技术与克隆技术相比较而言,克隆虽然也能使稀有的遗传物质变丰富,但必须采用活的生物体作为复制遗传物质的载体。PCR在摆脱此种活体依赖性方面前进了一大步,从而促进了基因操作效率的提高以及更重要的基因操作灵活性等方面的进步。PCR技术极大地扩展了遗传物质鉴定与操作的可能性,对分子生物学的现实与前景产生了不可估量的影响。PCR的新用途为科学研究开辟了新方向,这些新方向又反过来为PCR提供了新用途。现在,PCR已经成为所有分子生物学实验室的一个常规组成部分。

使用Taq耐热DNA聚合酶的常规PCR扩增体系如下。
10×扩增缓冲液l0ul
10—50mmol/LTris—HCl(pH7.5~9.0)
6~50mmol/LKCl或(NH4)2S04
1.5~5.0mmol/LMgCl2或MgS04
四种dNTP混合物各200umol/L
每种寡核苷酸引物各0.1-1.0umol/L
耐热DNA聚合酶2.0~2.5U
核酸模板102~105拷贝
加蒸馏水到100ul
 


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