1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37℃温和振摇培养5 h 或过夜。
2. 将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中，37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。 3. 细菌在冰水浴冷却10~15 min，然后转移到预冷的1升离心瓶中。于2℃，5 000 g 离心20 min 沉淀用5 ml 预冷的水溶解6。
4. 加入500 ml 冰冷的水，混匀，按步骤3重复离心1次，立即将上清倒掉，用残余的液体重悬细胞。 5. 新鲜制得的细菌
（1）将悬浮液加入到预冷的50 ml 聚丙烯管中，2℃，5 000 g 离心10 min。
（2）估计细胞沉淀的体积，沉淀用等体积的冰冷水重悬。
（3）按50~300 ul 分装于预冷的微量离心管中。
6. 冻存细菌
（1）加入40 ml 冰冷的10%甘油，混合，然后按照步骤5离心。
（2）估计沉淀的体积，然后加入等体积的冰冷的10%甘油，重悬菌体。
（3）按50~300 ul 分装于预冷的微量离心管中。
（4）于干冰上冷冻并贮存于-80℃。
7. 将电转化仪调到2.5 kV、 25 uF ，脉冲控制器调到200~400Ω;。
8. 将1 ul 质粒DNA加入到盛有新鲜制备的细菌或融化的冻存细菌的小管中，混匀。 9. 将转化混合物转移到预冷的电转化池中，吸干池的外表面，然后放入样品槽中。
10. 进行脉冲电转化，然后取出电转化池，马上加入1 ml SOC培养液，并且用巴斯德吸管转移到无菌的培养管中。
11. 于37℃，中速振荡培养30~60 min。
12. 分小份涂布于含有抗生素的LB平板上。 | 
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