分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接

2019.3.25
头像

zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

DNA

试剂、试剂盒

TAE琼脂糖

仪器、耗材

电泳仪离心机

实验步骤

1.  重复基本方案中的步骤1~5。

 

2.  在高质量的低融点胶中分离久DNA（0.7%，TAE缓冲液），切下体积尽可能小的所需DNA条带（20~50 μl ）至小离心管中。

3.  在70℃融化低融点胶10 min 以上，每个连接反应在不同的试管中进行。

4.  在的体积中混合含适当DNA的凝胶块（需要时用水补足）37℃放置数分钟。
 

5.  加入11 μl 冰冷的含2×缓冲液、ATP和T4 DNA连接酶的混合物，并于15℃温育1 ~48 h。

 

6.  在73℃重新融化胶5~10 min 取5 μl 连接产物加于200 μl 感受态大肠杆菌，见基本方案中的步骤8。

7.  重复基本方案中的步骤9。


克隆实验
互联网
文章推荐