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质粒DNA的小量制备实验——碱裂解小量制备法

2019.3.26
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱,在特定的条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。


实验材料

DNA

试剂、试剂盒

葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS乙酸甲乙醇

仪器、耗材

离心机漩涡混合器分光光度计

实验步骤

1.  接种一个单菌落于5 ml 无菌LB培养液中,在37℃培养至饱和状态(OD600≈4)。

 

2.  取1.5 ml 培荞液离心20 s 沉淀用100 ul 溶液重悬并于室温静置5 min。


3.  加入200 ul NsOH/SDS溶液,混匀。于冰上放置5 min。

 

4.  加入150 ul 乙酸钾溶液,在旋涡混合器上搌荡2 s,于冰上放置5 min。

 

5.  离心3  min然后吸取0.4 ml 上清液移入干净的微量离心管中,加0.8 ml  95%乙醇,于室温静置2 minI。

6.  室温离心3 min ,用1 ml 70%的酒精清洗沉淀,然后真空干燥。

7.  沉淀用30 ul TE缓冲液重溶,保存,取2.5~5 ul进行酶切分析。

 




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