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YAC克隆的分析实验——基本方案

2019.3.26
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。


实验材料

酵母菌

试剂、试剂盒

AHCYPD甘油

仪器、耗材

培养箱冷冻管

实验步骤

1.  用接种棒将含重组载体pYAC的AB1380菌株划线接种在AHC平板上，倒扣平板于30℃培养，直至长出1~3 mm 大小的红色菌落为止。

2.  短期保存：用Parafilm膜将平板周围封起来，于4℃可保存4~6周。

3.  长期保存：接种一个单独的YAC克隆的菌落于3.2 ml YPD培养基中，在30℃摇床过夜，然后加入1 ml 80%甘油，混匀，再分成0.2~1.0  ml 小份将甘油/菌悬液移至冷冻管中，-80℃保存。


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